[发明专利]雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱构建方法及检测方法

说明书

本发明公开了一种雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱构建方法及检测方法。本发明首次以HPLC指纹图谱和多指标的含量测定相结合，通过对多批次雅拢牛哈占波颗粒的定性鉴别和含量测定，为更好的监控和评价雅拢牛哈占波颗粒质量，指导规范化生产，具有较高的应用价值；为以多成分、多指标的雅拢牛哈占波颗粒的质量标准建立提供了研究线索，并为雅拢牛哈占波颗粒的深入开发奠定了坚实的基础。本发明方法制备得到的指纹图谱不仅能对雅拢牛哈占波颗粒剂同时进行定性、定量检测，还能定性、定量的检测雅拢牛哈占波丸剂、浸膏等剂型。

技术领域

本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱构建方法及检测方法。

背景技术

雅拢牛哈占波是傣医传统经方，收载于古傣医经书《档哈雅召书婉娜》，历史1300余年，该方由倒心盾翅藤、肾茶、圆锥南蛇藤、薏苡根、甘草组成，具有清热利尿化石的作用，用于治疗急慢性肾炎，肾盂炎，尿流感染，肾、输尿管、膀胱结石。西双版纳傣医医院在该传统经方基础上开发成医疗机构制剂“五淋化石胶囊”（滇药制字（Z）20082254K号）应用临床

20年，在治疗尿路感染和结石方面疗效确切且安全性高。同时，医院在对该处方制剂进行疗效研究时发现，其除排石作用外，还能降低血、尿肌酐，降低尿素含量，提示其有较好的保护肾功能作用。但由于目前傣医药发展缓慢，雅拢牛哈占波方剂缺乏现代可控的质控指标，质量标准有待提高和完善。

目前关于雅拢牛哈占波的质量检测研究报道较少，本发明通过建立HPLC指纹图谱结合

多成分同步含量测定方法，从定性和定量两个方面开展雅拢牛哈占波方剂的质量标准研究，提出质量评价标准建议，为雅拢牛哈占波方剂的质量标准研究提供线索，并为其他傣医传统经典名方的物质基础阐释提供参考。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱的构建方法，本发明的第二目的是提供一种雅拢牛哈占波方剂的检测方法。

本发明的第一目的是这样实现的，一种雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱的构建方法，按以下步骤实现：

1）供试品溶液的制备：将雅拢牛哈占波颗粒粉末用有机溶剂溶解后，超声提取，过滤，即得供试品溶液A；

2）对照品溶液的制备：

以雅拢牛哈占波方剂的6种主要活性成分即丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸B为对照品，用40-70%甲醇为溶剂配制成不同质量浓度的混合对照品溶液；

3）指纹图谱的构建：

吸取所述供试品溶液A和混合对照品溶液注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，即得雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱；建立对混合对照品液中各物质的浓度或含量与峰面积的线性关系，按照权利要求1步骤3中的色谱条件进样，检测待测雅拢牛哈占波方剂6种有效成分的峰面积，从而得到各物质的含量，即得到相应的主要活性成分的含量。

所述液相色谱的条件为：Diamonsil C18色谱柱，规格为：4.6×250 mm，5 μm；流动相为乙腈-0.5%冰乙酸水溶液；流速为0.6-1.0mL·min^-1，进样量为15-30μL，检测波长为260-330nm，柱温为20-45℃；

梯度洗脱条件如下：0~7 min，5%A；7~15 min，5%~10%乙腈；15~30 min，10%~14%乙腈；30~35 min，14%~18%乙腈；35~55 min，18%~21%乙腈；55~87 min，21%~32%乙腈；87~90min，32%~95%乙腈；90~100 min，95%乙腈；100~102 min，95%~5%乙腈；102~110 min，5%乙腈。

本发明的第二目的是这样实现的，一种雅拢牛哈占波方剂的检测方法，按以下步骤实现：

1）将待检测雅拢牛哈占波方剂样品溶解、提取并过滤制备得到供试品溶液B，将供试品溶液B以上述液相色谱条件注入高效液相色谱仪进行测定，得到待检测雅拢牛哈占波方剂的图谱；