[发明专利]雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱构建方法及检测方法

权利要求书

1.雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，按以下步骤实现：

1）供试品溶液的制备：将雅拢牛哈占波颗粒粉末用有机溶剂溶解后，超声提取，过滤，即得供试品溶液A；

2）对照品溶液的制备：

以雅拢牛哈占波方剂的6种主要活性成分即丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸B为对照品，用40-70%甲醇为溶剂配制成不同质量浓度的混合对照品溶液；

3）指纹图谱的构建：

吸取所述供试品溶液A和混合对照品溶液注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，即得雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱；建立对混合对照品液中各物质的浓度或含量与峰面积的线性关系，按照权利要求1步骤3中的色谱条件进样，检测待测雅拢牛哈占波方剂6种有效成分的峰面积，从而得到各物质的含量，即得到相应的主要活性成分的含量；

所述液相色谱的条件为：Diamonsil C18色谱柱，规格为：4.6×250 mm，5 μm；流动相为乙腈-0.5%冰乙酸水溶液；流速为0.6-1.0mL·min^-1，进样量为15-30μL，检测波长为260-330nm，柱温为20-45℃；

梯度洗脱条件如下：0~7 min，5%A；7~15 min，5%~10%乙腈；15~30 min，10%~14%乙腈；30~35 min，14%~18%乙腈；35~55 min，18%~21%乙腈；55~87 min，21%~32%乙腈；87~90 min，32%~95%乙腈；90~100 min，95%乙腈；100~102 min，95%~5%乙腈；102~110 min，5%乙腈。

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述步骤1中，有机溶剂为40-70%甲醇，用25-50 mL甲醇中溶解2-4g雅拢牛哈占波颗粒，超声提取25-35min，冷却至室温后称重，再用甲醇补足失去的重量，0.45μm滤膜滤过。

3.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，步骤2中，对照品溶液中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、对香豆酸、迷迭香酸、丹酚酸B的浓度分别为38-42μg•mL^-1，15-16μg•mL^-1，3.20-3.25μg•mL^-1，8.5-9.0μg•mL^-1，36.5-37.0μg•mL^-1，27.5-28.0μg•mL^-1。

4.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述雅拢牛哈占波方剂的HPLC指纹图谱在280nm下指定共有峰有32个，以17号峰为参比峰，以能代表配方中主要活性成分的4、5、8、17、24、30号峰为特征峰；其中，峰4为丹参素，峰5为原儿茶酸，峰8为原儿茶醛，峰17为对香豆酸，峰24为迷迭香酸，峰30为丹酚酸B。

5.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述雅拢牛哈占波方剂包括颗粒剂、汤剂、丸剂、片剂、浸膏。

6.雅拢牛哈占波方剂的检测方法，其特征在于，按以下步骤实现：

1）将待检测雅拢牛哈占波方剂样品溶解、提取并过滤制备得到供试品溶液B，将供试品溶液B以权利要求1所述液相色谱条件注入高效液相色谱仪进行测定，得到待检测雅拢牛哈占波方剂的图谱；

2）将待检测雅拢牛哈占波方剂的图谱与权利要求1构建的指纹图谱中各峰的相对保留时间和/或各峰的峰面积进行比较，完成对待检测雅拢牛哈占波方剂的定性和/或定量测定。

7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于，定量测定时，6种主要活性成分同步定量分析时，63-78min的检测波长为330nm，其余时间的检测波长为280nm。