[发明专利]用于检测肺炎克雷伯菌的PCR引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测肺炎克雷伯菌的PCR引物，其特征在于，所述PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测肺炎克雷伯菌的PCR引物，其特征在于，所述正向引物的5’端标记有生物素，所述反向引物的5’端标记有荧光素；

优选地，所述荧光素包括FITC、FAM或TAMRA。

3.一种检测肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，其包括：肺炎克雷伯菌检测液、PCR反应液、阳性对照品、阴性对照品以及胶体金核酸检测试纸条；

其中，所述肺炎克雷伯菌检测液中含有如权利要求1或2所示的PCR引物。

4.根据权利要求3所述的检测肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述胶体金核酸检测试纸条固定在PVC底板上，所述胶体金核酸检测试纸条包括依次相连接的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

所述胶体金垫上包被有胶体金标记的抗生物素抗体。

5.根据权利要求4所述的检测肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设有检测区和质控区，所述检测区包被荧光素单克隆抗体，所述质控区包被抗鼠抗体。

6.根据权利要求3所述的检测肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述肺炎克雷伯菌检测液中所述PCR引物的浓度为50～400nM。

7.一种肺炎克雷伯菌的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，其利用如权利要求3～6任一项所述的试剂盒进行，包括：

将从待测样品中提取的DNA模板置于具有所述PCR引物的PCR扩增体系中，进行PCR反应得到扩增产物；

将所述扩增产物稀释后滴加至所述胶体金核酸检测试纸条的样品垫上，通过显色有无判断所述待测样品中是否含有肺炎克雷伯菌。

8.根据权利要求7所述的肺炎克雷伯菌的胶体金免疫层析检测方法，其特征在于，所述PCR扩增体系总量25μL，包括：2μL的所述肺炎克雷伯菌检测液、12.5μL的PCR反应液、1μL的DNA模板以及9.5μL的ddH₂O。