[发明专利]一种重组蛋白质微球及其制备方法和应用

说明书

本发明提出了一种重组蛋白质微球及其制备方法和应用，属于生物诊断技术领域，包括：S1.将结核分枝杆菌接种于TSB培养基中培养，离心，洗涤，加入蛋白酶抑制剂，超声，离心，得到菌体蛋白，与琼脂糖凝胶混合，孵育，洗涤，洗脱，得到结核分枝杆菌Rv1886c蛋白；S2.将结核分枝杆菌Rv1886c蛋白溶于水中，得到水相；S3.将PLGA、表面活性剂溶于有机溶剂中，得到油相；S4.将水相和油相混合后，加入PVA溶液，乳化，反应，离心，洗涤，干燥，得到重组蛋白质微球。本发明制得的重组蛋白质微球性能好、成囊成膜性强、制备方便，可以灵敏的用于制备结核病诊断或鉴定的药物及产品中，灵敏度高，特异性好，准确度高。

技术领域

本发明涉及生物诊断技术领域，具体涉及一种重组蛋白质微球及其制备方法 和应用。

背景技术

结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，M.tb)感染所致的一种慢性传染病，是由单一致病菌感染引起的 死亡率最高的疾病。

目前，用于TB诊断的方法有X光检查、病原学检测(F液抗酸染色法及细 菌培养法)、结核菌素(purifiedprotein derivative，PPD)皮肤试验及TB核酸序 列扩增技术等，病原学检测是TB诊断的金标准，我国的M.tb病原学诊断率较低， 2020年WHO报告显示，我国TB病原学阳性率为47％，低于全世界57％的检 出率，仅靠此法会延误对患者的治疗；PPD皮试是一种免疫学检测方法，具有操 作简单的优势，但难以区分卡介苗的免疫效果及致病性M.tb的感染，因此诊断 价值不高；在TB早期诊断中，核酸扩增技术是病原学诊断的重要补充，但因其 成本高及对检测环境的严格要求，限制了其在基层医院的应用，血清学检测具有 操作简便、灵敏度高、适用于肺外结核和肺结核等优势，因此，获得高灵敏度、 高特异性的M.tb抗原或抗体，并将其应用于血清学检测TB，是早期诊断TB的 理想方法。

发明内容

本发明的目的在于提出一种重组蛋白质微球及其制备方法和应用，具有性能 较好、成囊成膜性强、制备方便等优点，制得的重组蛋白质微球可以灵敏的用于 制备结核病诊断或鉴定的药物及产品中，灵敏度高，特异性好，准确度高。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种重组蛋白质微球的制备方法，包括以下步骤：

S1.结核分枝杆菌Rv1886c蛋白的提取：将结核分枝杆菌接种于TSB培养基 中培养，离心，洗涤，加入蛋白酶抑制剂，超声，离心，得到菌体蛋白，将菌体 蛋白和琼脂糖凝胶混合，孵育，洗涤，洗脱，得到结核分枝杆菌Rv1886c蛋白；

S2.水相的制备：将步骤S1制得的结核分枝杆菌Rv1886c蛋白溶于水中，得 到水相；

S3.油相的制备：将PLGA、表面活性剂溶于有机溶剂中，得到油相；

S4.重组蛋白质微球的制备：将步骤S2中的水相和步骤S3中的油相混合后， 加入PVA溶液，乳化，搅拌反应，离心，洗涤固体，干燥，得到重组蛋白质微 球。

作为本发明的进一步改进，步骤S1的具体步骤为：将结核分枝杆菌接种于 含5-10％小牛血清TSB培养基中，35-40℃培养40-50h，3000-5000r/min离心 10-15min，用pH＝7.5-8.5的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次，加入蛋白酶 抑制剂，300-500W超声裂解10-15min，7000-12000r/min离心20-30min，过滤， 得到菌体蛋白，将菌体蛋白和琼脂糖凝胶混合，0-10℃孵育1-3h，用pH＝7.5-8.5 的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次，用含0.2-0.5mol/LNaCl的pH＝7.5-8.5 的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次洗脱，得到结核分枝杆菌Rv1886c蛋白。