[发明专利]一种重组蛋白质微球及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.结核分枝杆菌Rv1886c蛋白的提取：将结核分枝杆菌接种于TSB培养基中培养，离心，洗涤，加入蛋白酶抑制剂，超声，离心，得到菌体蛋白，将菌体蛋白和琼脂糖凝胶混合，孵育，洗涤，洗脱，得到结核分枝杆菌Rv1886c蛋白；

S2.水相的制备：将步骤S1制得的结核分枝杆菌Rv1886c蛋白溶于水中，得到水相；

S3.油相的制备：将PLGA、表面活性剂溶于有机溶剂中，得到油相；

S4.重组蛋白质微球的制备：将步骤S2中的水相和步骤S3中的油相混合后，加入PVA溶液，乳化，搅拌反应，离心，洗涤固体，干燥，得到重组蛋白质微球。

2.根据权利要求1所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，步骤S1的具体步骤为：将结核分枝杆菌接种于含5-10％小牛血清TSB培养基中，35-40℃培养40-50h，3000-5000r/min离心10-15min，用pH＝7.5-8.5的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次，加入蛋白酶抑制剂，300-500W超声裂解10-15min，7000-12000r/min离心20-30min，过滤，得到菌体蛋白，将菌体蛋白和琼脂糖凝胶混合，0-10℃孵育1-3h，用pH＝7.5-8.5的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次，用含0.2-0.5mol/LNaCl的pH＝7.5-8.5的0.01-0.05mol/L的Tris-HCl洗涤2-3次洗脱，得到结核分枝杆菌Rv1886c蛋白。

3.根据权利要求2所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂选自亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑弹性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素中的至少一种，添加量为体系总质量的1-3wt％。

4.根据权利要求2所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，所述菌体蛋白和琼脂糖凝胶的质量比为(2-5)：10。

5.根据权利要求1所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述水相中结核分枝杆菌Rv1886c蛋白的含量为3-5wt％。

6.根据权利要求1所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述表面活性剂选自失水山梨醇单油酸酯、二异丁基酚聚氧乙烯醚、脱氢松香胺聚氧乙烯醚、司盘-80中的至少一种；所述油相中所述PLGA的含量为5-12wt％；所述油相中所述表面活性剂的含量为1-2wt％。

7.根据权利要求1所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述PVA溶液的含量为3-5wt％；所述水相、油相、PVA溶液的质量比为(3-5)：7：(1-2)。

8.根据权利要求1所述重组蛋白质微球的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述乳化条件为10000-12000r/min转速下乳化3-7min；所述离心条件为3000-5000r/min转速下离心10-15min；所述干燥温度为20-40℃，时间为2-4h。

9.一种权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的重组蛋白质微球。

10.一种如权利要求9所述重组蛋白质微球在制备结核病诊断或鉴定的药物及产品中的应用。