[发明专利]一种Rheb蛋白激活剂及其应用

权利要求书

1.ATP6AP1蛋白的截短体在制备激活Rheb蛋白而预防和/或治疗糖尿病药物中的用途，其特征在于，所述ATP6AP1蛋白的截短体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种筛选Rheb蛋白激活剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）构建生物素连接酶与Rheb融合表达载体，将载体转入宿主细胞内，药物筛选稳定表达Rheb蛋白的细胞株，同时构建对照细胞株；

2）向稳定表达Rheb蛋白的细胞株中加入胰岛素和生物素进行刺激，向对照细胞株中加入生物素刺激，然后进行质谱检测，分析富集蛋白；

3）在有/无进行胰岛素刺激条件下，分别将稳定表达Rheb蛋白的细胞株中的富集蛋白和对照细胞株中的富集蛋白之间重叠的蛋白扣除，获得有/无进行胰岛素刺激条件下的Rheb邻近蛋白，分析Rheb邻近蛋白，经鸟嘌呤核苷酸交换因子筛选条件，得ATP6AP1蛋白的截短体；所述ATP6AP1蛋白的截短体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，胰岛素的浓度为0.1nM-10μM，生物素的浓度为50μM-500μM。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，刺激的时间为10-20min。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，生物素连接酶包括生物素连接酶xxID，生物素连接酶与Rheb融合表达载体为HAFlag-xxID-Rheb。