[发明专利]一种基于聚集诱导发光比率荧光探针的ELISA检测方法

权利要求书

1.一种基于聚集诱导发光比率荧光探针的ELISA检测方法，其特征在于：

所述比率荧光探针包括红色AIE荧光微球RAIENPs和绿色AIE荧光微球GAIENPs两种颜色AIE荧光微球制备成的探针；所述RAIENPs和GAIENPs的激发波长同为360nm、发射波长分别为501nm和610nm，发射峰无交叠；

所述ELISA检测方法步骤为：

所述RAIENPs偶联抗原(RAIENPs@Antigen)，所述GAIENPs偶联生物素或地高辛抗体(GAIENPs@Bio或GAIENPs@DigmAbs)，所述ELISA包被抗体和链霉亲和素(SA)或地高辛全抗原(Dig-BSA)；

所述RAIENPs@Antigen与ELISA上的抗体结合，在610nm处发出红色的荧光，读值记为R；

所述GAIENPs@Bio与ELISA板上的SA结合或GAIENPs@DigmAbs与Dig-BSA结合，在501nm处发出绿色荧光，读值记为G；

通过计算R/G的值定量检测目标物浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于聚集诱导发光比率荧光探针的ELISA检测方法，其特征在于，所述ELISA检测方法包括以下步骤：

1)包被：用CBS 9.6将目标抗体以及链霉亲和素或地高辛全抗原稀释为1μg/mL每孔加入100μL，于4℃包板过夜后用PBST洗板3次；

2)封闭：每孔300μL 0.2％明胶CBS9.6于37℃封闭2h后用PBST洗板3次；

3)捕获目标抗原：阴性每孔50μLPBS 7.4，阳性每孔50μL目标物抗原，再加入50μL红色AIE微球偶联的抗原以及绿色AIE微球偶联的链霉亲和素或地高辛抗体，37℃反应30min，PBST洗板三次；

4)读值：绿色AIE荧光微球偶联生物素与包被的链霉亲和素(地高辛抗体与地高辛抗原)结合，在501 nm处发出绿色荧光，读值记为G；加入待测物与红色AIE荧光微球偶联的目标物抗原(标记抗体)后，抗原与抗体特异性结合，在610nm处发出红色荧光，读值记为R；

对于直接竞争ELISA，随着目标物的增多，红色荧光R值越低，R/G值越低；对于双抗体夹心ELISA，随着目标物的增多，红色荧光R值越高，R/G值越高。

3.根据权利要求1所述的一种基于聚集诱导发光比率荧光探针的ELISA检测方法，其特征在于，所述RAIENPs和GAIENPs的粒径分别为150nm±5％和350nm±5％。

4.根据权利要求1所述的一种基于聚集诱导发光比率荧光探针的ELISA检测方法，其特征在于，制备红色AIE荧光微球的红色AIE分子RAIE的结构式为：

制备绿色AIE荧光微球的绿色AIE分子GAIE的分子式为：