[发明专利]羟乙基淀粉血红蛋白偶联物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种羟乙基淀粉血红蛋白偶联物及其制备方法与应用。羟乙基淀粉血红蛋白偶联物由羟乙基淀粉偶联血红蛋白得到。本发明提供的偶联物可有效地提高血管内的胶体渗透压，从而有效增加并保持血管内的血容量，促进失血性休克时的组织微循环。该偶联物中的血红蛋白能够结合、输送和释放氧气来治疗因失血性休克和重度贫血导致的组织缺氧，维持体内细胞的正常代谢。本发明提供的羟乙基淀粉血红蛋白偶联物可有效解决临床上治疗失血性休克时既需要缓解组织缺氧又需要扩大血容量的问题，其作为血浆扩容剂可同时有效缓解失血性休克引发的组织缺氧和血容量降低。

技术领域

本发明涉及血液代用品技术领域，特别是涉及血红蛋白氧载体类血液代用品——羟乙基淀粉血红蛋白偶联物及其制备方法与应用。

背景技术

急性大量失血会导致体内循环血量降低，从而引发低血容量休克。这种大量失血引起的低血容量休克称为失血性休克。常见于外伤引起的出血、消化性溃疡出血、食管曲张静脉破裂、妇产科疾病所引起的出血等。失血性休克可导致组织缺氧、细胞无氧代谢以及血容量减少，从而影响机体正常的生理功能和微循环(微动脉与微静脉之间的血液循环)。临床上失血性休克的主要治疗手段是补充血容量，主要通过输注全血、血浆、浓缩红细胞、血液代用品和/或补液(如输注醋酸林格氏液)等实现。

输血(如输注全血、血浆、浓缩红细胞)可以为组织输送氧气、增加血容量、促进微循环、维持体内细胞的正常代谢，是缓解失血性休克的有效方法。然而，输血也存在一些局限，如输血前需要交叉配型、有传播病原体疾病(如艾滋病和丙型肝炎)和引发过敏反应的风险、也存在以上血制品供应短缺等问题。为了解决血制品供应短缺的问题，血液代用品应运而生。

广义上说，血液代用品包括血浆代用品、血小板代用品和红细胞代用品。出现失血性休克时，为了迅速补足血容量，血浆代用品是一种用以增加和维持血浆容量的人工合成制品，血浆容量增加后能够促进微循环，现已被广泛应用于严重失血、失液、稳定血液循环以及稀释血液等急性输血环节，也称为血浆扩容剂。目前临床常用的血浆扩容剂有晶体溶液和胶体溶液。晶体溶液，如等渗生理盐水，无抗原性、无细菌、无致热源，但与体液环境等渗，可自由通过体内各种膜系统，无法有效维持血管内的渗透压，不能保持血管内的血容量。胶体溶液，如右旋糖酐、羟乙基淀粉、人血白蛋白、氧化聚明胶和聚维酮等，渗透压高于体液环境且不易透膜，与晶体溶液相比能有效地保持血管内的血容量，从而促进失血性休克时的组织微循环，维持体内细胞的正常代谢。

由于失血性休克往往伴随组织缺氧，仅输注血浆扩容剂仅能增加血容量，无法解决组织缺氧和细胞无氧代谢的问题。为了治疗失血性休克，迫切需要一种既能为组织输送氧气又能扩大血容量的产品。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，第一方面，提供一种有效增加血容量且能为组织输送氧气的羟乙基淀粉血红蛋白偶联物，由羟乙基淀粉偶联血红蛋白得到，偶联物的分子量＞200kDa；优选的，偶联物中的血红蛋白为四聚体结构；更优选的，偶联物中的血红蛋白二级结构完整；并且血红蛋白中血红素和珠蛋白之间的结构没有发生改变。

其在圆二色光谱谱图中的260nm、285nm和Soret带处有特征峰；可选的，其在紫外-可见光谱谱图中410nm、540nm和576nm处有三个特征峰，优选的，其在630nm处无波峰；可选的，其在红外光谱谱图中的3300cm^-1、2925cm^-1、2851cm^-1、1650cm^-1和1540cm^-1处有特征峰，优选的，在1540cm^-1处和1650cm^-1处的特征峰强度强于血红蛋白。

羟乙基淀粉的分子量为100-300kDa，优选130-200kDa；血红蛋白选自人血红蛋白、牛血红蛋白或猪血红蛋白，更优选的，偶联物为bHb-HES130和/或bHb-HES200。

偶联物的P₅₀值(氧饱和度为50％时的氧分压)为10mmHg-20mmHg。