[发明专利]检测转基因番木瓜的引物对组合、试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种检测转基因番木瓜的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述引物对组合其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.16所示；通过一次高通量检测，实现多种转基因成分的定性与定量检测，避免了现有Real‑time技术需要进行多次扩增和检测才能覆盖样本中的多个靶标转基因成分，同时避免了该技术出现的假阳性或假阴性结果，因此本申请的引物对组合具有高效、准确和灵敏的优势，应用前景较好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种检测转基因番木瓜的引物对组合、试剂盒及检测方法。

背景技术

番木瓜是全球普遍种植的作物，含有丰富的植物蛋白和食用油脂，是重要的食用和饲用作物。在当前难以大幅增加番木瓜种植面积的背景下，利用现代生物技术培育高产优质转基因番木瓜新品种，对于促进番木瓜产业振兴具有十分重要的意义。但随着大量的转基因番木瓜被直接或间接地制成食品以及国际社会对转基因产品安全性问题的日益关注，农产品中的转基因成分检测已纳入国内外检验检疫部门的检测项目并逐渐得到加强。因此，开发高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。

转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂，容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过六重，否则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制了该技术在检测中的广泛应用。

因此研发一种高效、灵敏和通量高的转基因产品检测方法，成为亟待解决的关键问题。

发明内容

本申请提供了一种检测番木瓜转的引物对组合、试剂盒及检测方法，以解决如何高效检测转基因番木瓜和品系的技术问题。

第一方面，本申请提供了一种检测转基因番木瓜的引物对组合，所述引物对组合包括:

特异性扩增p35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；

特异性扩增t35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示；

特异性扩增pNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示；

特异性扩增tNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示；

特异性扩增NPtII的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.10所示；

特异性扩增PRSV_CP的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.12所示；

特异性扩增replicase的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13至SEQ ID NO.14所示；

和/或，特异性扩增GUS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.15至SEQ ID NO.16所示。

可选的，所述引物对组合包括：

特异性扩增Rainbow-left的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.17至SEQ IDNO.18所示；