[发明专利]一种同时检测AFB1和ZEN的双靶适配体传感器及其制备方法

说明书

本发明公开了一种同时检测黄曲霉毒素B1(AFB1)和玉米赤霉烯酮毒素(ZEN)的双靶适配体传感器及其制备方法，涉及生物传感器技术领域；引入二硫化钼‑还原性氧化石墨烯(MoS₂‑rGO)纳米材料提高工作电极的生物相容性，比表面积和导电性能，运用6‑(二茂铁基)己硫醇(FC6S)和硫堇(Thi)通过纳米金(AuNPs)分别标记AFB1适配体(DNA1)和ZEN适配体(DNA2)，构建的双靶标适配体功能化探针通过金硫键固定到电极上，该探针可在差分脉冲伏安法(DPV)不同电位下产生互不干扰的可区分电流峰以实现对AFB1和ZEN的同时检测；构建的传感器具有较好的重现性、抗干扰性和稳定性，在实际样品检测中获得了满意的回收率。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，具体涉及一种同时检测AFB1和ZEN的双靶适配体传感器及其制备方法。

背景技术

真菌毒素是由丝状真菌产生的有毒次级代谢产物，具有致癌、致突变、致畸、神经毒性和免疫毒性等作用，真菌毒素会在作物生长、收获、储存和加工过程中污染农作物和农产品，在已知的真菌毒素中，黄曲霉毒素B1(AFB1)已被国际癌症研究机构(IARC)列为1类致癌物，玉米赤霉烯酮毒素ZEN已被列为3B类致癌物，这两种真菌毒素通常共存于粮油作物中，产生的协同增效的毒理学效应即使是相对较低的摄入量也会对人类和动物健康带来严重危害。因此，同时监测农产品中的AFB1和ZEN污染是非常必要的。

为了保护食品安全和公共健康，我国已经建立了谷物及其制品中的AFB1(5-20μg/kg)和ZEN(60μg/kg)的最大限量标准。目前，酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫测定、气相色谱-质谱、比色和薄层色谱等多种分析方法已被用于检测粮油样品中的AFB1和ZEN，虽然这些传统方法稳定可靠，但由于试剂用量大，样品预处理繁琐，步骤复杂，成本高昂等缺点，使其应用受到限制。

核酸适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列或者短的多肽，能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合，具有许多优点，例如长期稳定性，抗变性，以及固有的选择性；因此，适配体作为生物传感应用中的分子识别元件是有潜在应用前景的，迄今为止，已经产生了多种针对AFB1和ZEN的高特异性和亲和性的适配体，在这些适配体的基础上还开发了一系列的比色和电化学适配体传感器。

但目前常见的电化学适配体传感器，大多针对单组分检测目标物，检测工作量大，检测效率低，无法满足现场高效率多组分同时检测的需求。因此，国内外研究者开始研究同时检测多种目标物的检测技术。目前，同时检测多种真菌毒素的传感器存在构造复杂、成本较高、检测范围较窄等问题，为解决这一问题，本发明设计构建了针对两个靶标物质的双靶电化学适体传感器，同时检测AFB1和ZEN，检测灵敏度及检测范围满足检测要求。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明提供一种同时检测AFB1和ZEN的双靶适配体传感器及其制备方法，基于电活性物质Thi和FC6S在不同电位下产生可区分的DPV峰来构建适配体传感器，以解决现有技术无法现场高效率多组分同时检测的技术问题。

本发明采用的技术方案如下：

一种同时检测AFB1和ZEN的适配体传感器，包含AFB1适配体DNA1、ZEN适配体DNA2以及金电极，所述DNA1采用硫堇、纳米金进行标记形成DNA1-AuNPs-Thi适配体功能化探针，所述DNA2采用6-(二茂铁基)己硫醇、纳米金进行标记形成DNA2-AuNPs-FC6S适配体功能化探针，所述金电极的表面引入二硫化钼-还原性氧化石墨烯，标记后的双靶适配体功能化探针通过金硫键固定于电极表面。

同时检测AFB1和ZEN的适配体传感器的制备方法，包括如下步骤：