[发明专利]一种探针引物及其用于伊犁贝母专属性检测的荧光定量PCR检测方法和用途

权利要求书

1.一种探针引物，其特征在于，所述探针引物是由SEQ ID NO：22-27所示的DNA序列组成。

2.一种用于伊犁贝母专属性检测的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括下述步骤：

称取贝母样品及样品前处理；

从所述样品中提取DNA并制备DNA模板；及

选择探针引物；

优化反应条件；

根据不同的检测需求，设定不同的判定依据。

根据不同的检测需求，设定不同的判定依据；其中对于定性检测，根据设定的CT值临界点(如CT35)判定是否检出；对于半定量检测，根据与阳性对照的CT值之差的绝对值作为判定依据，差值越小，含量越高；对于定量检测，一方面同时设置标准品(S)，另一方面采用同体系中双探针标记进行扩增，即包括目的探针(P)和内参探针(C)；供试品中专属探针(P)和通用探针(C)的定量检测比值可表示为△CT(T)，相应的标准品可表示为△CT(S)，△△CT＝△CT(T)-△CT(S)从而目的DNA(伊犁贝母)所占比例计算公式可表示为：

其中，所述方法能够用于检测所述样品中是否含有伊犁贝母；所述探针引物为权利要求1所述序列号为SEQ ID NO 22-27的探针引物。

3.根据权利要求2所述的方法，其中每组探针引物包括三个序列，并且当任何一组用于检测时其中所包括的三个序列是同时使用而不拆分。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述样品为中药材、饮片或成方制剂。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述提取DNA的步骤采用紫外分光光度法进行定量和纯度测定。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述反应条件包括：94℃预变性5min，94℃变性30s，60℃退火30～60s，60℃收集荧光。根据所选反应预混液性质的不同，反应条件可进行调整。

7.一种探针引物的用途，其特征在于，所述探针引物为权利要求1所述的探针引物组；所述探针引物通过荧光定量PCR检测方法实现伊犁贝母专属性检测。

8.根据权利要求7所述的用途，其中每组探针引物包括三个序列，并且当任何一组用于检测时其中所包括的三个序列是同时使用而不拆分。

9.根据权利要求7所述的用途，其中检测的所述样品为中药材、饮片或成方制剂。

10.一种试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的探针引物，并且所述试剂盒用于伊犁贝母专属性检测。