[发明专利]一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法

说明书

本发明为一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，属于天然产物提取领域。该方法包括以下步骤：S1，以超临界CO₂萃取藤椒油为原料，加入低共熔溶剂进行超声辅助提取，萃取完成后离心，收集下层DES层，得到羟基山椒素类化合物DES提取液；所得提取液经有机溶剂反萃取法，回收羟基山椒素类成分，得到羟基山椒素类成分富集产物；S2，动态轴向制备色谱分离纯化：羟基山椒素类成分富集产物用1‑3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向压缩制备液相分离，流动相为甲醇和水等。该工艺过程简单，不需要大量的纯化步骤，溶剂方便回收，纯度高，适合大批量工业化生产，具有很强的使用价值。

技术领域

本发明为一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，属于天然产物提取领域。

背景技术

藤椒(竹叶花椒，Zanthoxylum armatum DC)是中国传统药食两用资源，气味清香、柔和、无刺激和苦涩味。研究表明，山椒素及其由烷基不饱和度差异或碳链氧化引起结构变化的酰胺类同系物被视为藤椒麻味物质基础，也是重要品质保障，以羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素，羟基-γ-山椒素，羟基-ε-山椒素为主，可能通过激活瞬时受体电位(transientreceptor potential,TRP)V1和TRPA1或阻断离子通道引发辛麻感，同时具有麻醉镇痛、消炎、保护肠道等功能。然而，该类化合物结构不稳定，在空气中极易发生异构化、水解和氧化，导致高纯度山椒素类的大规模制备存在技术瓶颈。目前国内外尚未建立花椒/藤椒麻味评价及适用于工业生产的麻味物质提取的标准方法，导致花椒和藤椒原料及其制品的质量良莠不齐，严重影响消费者的利益和市场有效监管。

中国专利CN102771747B，CN102690208A，CN105237430A公布的山椒素类化合物的制备工艺包括，利用有机溶剂或超临界CO₂等对花椒/藤椒样品进行提取，进而采用硅胶、凝胶色谱纯化，收集不同洗脱条件下的馏分，进而利用制备型薄层色谱、制备/半制备型HPLC等仪器得到较高纯度单体，制备过程繁琐复杂，制备量小，效率低，因此，研究一种能够从藤椒中快速、宏量提取制备出多种高纯度单体的制备工艺具有重大的科学意义和工程应用价值。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种低共熔溶剂提取，动态轴向色谱制备羟基山椒素方法，该方法是一种基于绿色新型低共熔溶剂提取，工业级快速制备高纯度羟基山椒素类化合物的方法，为藤椒麻味成分分析和质量评价提供对照品。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

一种工业级快速制备高纯度山椒素类化合物的方法，包括以下步骤：

S1，以超临界CO₂萃取藤椒油为原料，加入低共熔溶剂(DES)，超声辅助提取，萃取完成后离心，收集下层DES层，得到羟基山椒素类成分DES提取液；所得提取液经有机溶剂反萃取法，回收羟基山椒素类成分，得到羟基山椒素类成分富集产物。

作为优选，所述低共熔溶剂由如下方法制得，氢键供体与氢键受体按一定摩尔比比例混合，封口后置于80℃加热共溶至澄清，形成DES溶剂，常温下静置备用。

作为优选，所述氢键供体为氯化胆碱，氢键受体为甲酸、乙酸、乳酸中的一种，摩尔比为1:2。

作为优选，所述离心转速为4000r/mi，离心时间为10min。

作为优选，所述超声辅助的处理条件为料液比为1:5～1:10(w/v)，萃取功率为150～200w，提取时间为0.5h。

作为优选，所述反萃取采用的有机溶剂为乙酸乙酯，料液比为1:5～1:10。

S2，动态轴向制备色谱分离纯化：山椒素类富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向压缩制备液相分离，流动相为甲醇和水，检测波长为254nm，根据不同保留时间收集目标成分，洗脱液经减压旋蒸浓缩，冷冻干燥后得到各单体化合物。