[发明专利]一种通过光交联短肽定向固定化酶的方法

权利要求书

1.一种通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)远离酶的活性位点进行光交联短肽的设计；

(2)将设计好的光交联短肽连接在载体表面；

(3)酶溶液与(2)中得到的载体混合进行吸附反应；

(4)将(3)中得到的混合物进行紫外光照处理，产物经沉淀，洗涤后得到光交联定向固定化酶。

2.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：所述酶包括却不限于蔗糖异构酶。

3.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于步骤(1)具体为：使用Gromacs和Auto Dock软件对酶的三维结构进行模拟与光交联短肽设计，设计的短肽优选为能与酶发生稳定吸附结合的光交联短肽，其中光交联短肽含有3～9个天然氨基酸，且C端为光交联性非天然氨基酸(二苯甲酮类)，包括却不限于4-L-苯甲酰基苯丙氨酸。

4.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(2)中所述载体为表面带有环氧基团的材料，包括环氧树脂、环氧硅球。环氧树脂载体的材料为聚丙烯酸甲酯，粒径为0.2-200μm。

5.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(2)中的连接反应的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，浓度为10～100mM，pH为7.5～10.0；所述的短肽质量为0.5～5mg，溶解于缓冲溶液中；所述的载体为环氧树脂，树脂表面环氧基团与短肽的摩尔质量比为5～50。

6.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的连接反应的反应时间为10-20h，反应温度为20～30℃。

7.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(3)中吸附反应的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，浓度为10～100mM，pH为5.0～6.5。所述的酶溶液初始浓度为0.5～10mg/mL，载体的质量为5～20mg。

8.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(3)中，吸附反应过程中，反应温度为0～20℃，反应时间为2～10h。

9.根据权利要求1中所述的通过光交联短肽定向固定化酶的方法，其特征在于：步骤(4)中紫外光照的波长为350～365nm，功率为25w～120w，照射时间为1～30min。