[发明专利]一种提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量的试剂、方法和应用

说明书

本发明涉及一种提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量的试剂、方法和应用，属于抗体检测技术领域。本发明提供了阻止Agrin蛋白分泌表达的试剂在提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量中的应用。本发明所述应用利用LRP4与Agrin相互作用使得Agrin可以定位于细胞膜上，减少Agrin的分泌，从而减少分泌型Agrin对细胞的影响，进而改善Agrin免疫荧光制片质量差的问题，还能明显增强活细胞免疫荧光信号。

技术领域

本发明涉及抗体检测技术领域，具体涉及一种提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量的试剂、方法和应用。

背景技术

神经肌肉接头(Neuromuscular junction，NMJ)是连接运动神经元末梢和骨骼肌的胆碱能突触，控制着骨骼肌的收缩。重症肌无力(myasthenia gravis，MG)是自身免疫性NMJ病变，临床表现为骨骼肌无力症状。多数病人(约88％)可检测出抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)和肌肉特异性酪氨酸激酶抗体(MuSK-Ab)阳性。

Agrin是一种基底膜蛋白，可与LRP4结合，激活MuSK进而诱导AChR的聚集，在NMJ结构形成和维持中有着重要作用。Agrin抗体可作为MG新的诊断标志物。

LPR4(low-density lipoprotein receptor-related protein4，低密度脂蛋白受体相关蛋白4)是一种单次跨膜蛋白，从属于低密度脂蛋白受体相关蛋白家族。它拥有非常大的胞外段(长度达到1700多氨基酸)，包括LDLα、4个β螺旋和多个EGF功能域。在肌肉，LRP4特征性地表达在神经肌肉接头(NMJ)区域，与其它关键蛋白(agrin和MuSK)相互作用，一起调控NMJ内AChR聚集体形成，从而对NMJ的形成、维持和再生起着关键性作用。

Agrin结合LRP4的N末端区域，促进LRP4与MuSK之间的相互作用，激活MuSK磷酸酶活性，使MuSK发生二聚磷酸化、AChR聚集从而传导信号。然而Agrin自身抗体破坏了Agrin/LRP4/MuSK信号通路，破坏Agrin和LRP4以及LRP4和MuSK之间的相互作用，导致信号无法传递。在大多数重症肌无力患者中，可以检测到抗AChR抗体和抗MuSK抗体，在另外一些重症肌无力患者中，可以检测到抗Agrin抗体和抗LRP4抗体。Agrin抗体不仅是重症肌无力诊断标志物，还存在于肌萎缩侧索硬化症(ALS)等疾病中。

检测Agrin抗体是诊断MG的特征性指标，常用血清学方法检测患者血清和脑脊液中的Agrin抗体。常用的方法包括免疫组织化学法、免疫荧光、免疫胶体金、酶联免疫吸附(ELISA)等等。

免疫荧光法(CBA)因其简单快捷、结果直观被广泛应用于自身抗体的检测。但在免疫荧光制片过程中，细胞状态差、有大量空隙的话都会影响细胞制片质量，进而不方便观察，影响检测效率。目前，制备得到的Agrin抗体检测用免疫荧光制片质量差，需要新的方法解决该问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量的试剂、方法和应用。本发明所述试剂通过阻止Agrin蛋白分泌表达，能够提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量，解决Agrin蛋白爬片细胞生长差和活细胞免疫荧光信号差的问题。

本发明提供了阻止Agrin蛋白分泌表达的试剂在提高Agrin蛋白免疫荧光制片质量中的应用。

优选的是，所述阻止Agrin蛋白分泌表达的试剂包括：过表达Agrin蛋白和LRP4蛋白的试剂；或，过表达Agrin-GPI融合蛋白的试剂。

本发明还提供了阻止Agrin蛋白分泌表达的试剂，所述试剂包括阻止Agrin蛋白分泌表达的表达载体或阻止Agrin蛋白分泌表达的细胞。

优选的是，所述阻止Agrin蛋白分泌表达的细胞由阻止Agrin蛋白分泌表达的表达载体经细胞转染获得。