[发明专利]一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体

说明书

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体，包含以下原料：胶原蛋白、L‑谷氨酰胺、硫酸镁，氯化钙、氯化钾、丙酮酸钠、D‑葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钙、L‑甲硫氨酸、羟乙基哌嗪乙磺酸和水；制备方法：将各组分按配比加入水中，加热溶解，充分搅拌，直至所有成分完全溶解，形成半凝胶；通过微流道向半凝胶中通入等量空气，形成均一气泡，至气泡充满材料；半凝胶完全凝固，穿透贯通半凝胶内气泡，形成规格排列的微米多孔结构。本发明可溶性微载体能够很好的支持干细胞贴附生长，为干细胞提供足够大的生长表面积，减少培养过程中细胞受到的剪切力，简化最终的细胞回收过程，保证最终回收得到高质量的干细胞。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体。

背景技术

干细胞是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始细胞，可以分化形成各种功能细胞及组织器官。干细胞在医疗领域具有广泛的作用，可通过高活性干细胞的回输来激活人体自身的“自愈功能”，对病变的细胞进行补充与调控，激活细胞功能，增加正常细胞的数量，提高细胞的活性，改善细胞的质量，防止和延缓细胞的病变，恢复细胞的正常生理功能，从而达到疾病康复、对抗衰老的目的。

临床上干细胞使用量较大，传统培养方式难以在短时间内获得大批量高活性的干细胞。目前多采用生物反应器进行干细胞的大规模扩增，但目前常用微载体在干细胞培养过程中常常面临一些问题：

1)细胞培养过程中所受剪切力较大；

2)干细胞回收困难；

3)微载体提供的生长表面积有限。

有鉴于此，有必要提供一种新的用于干细胞大规模培养的可溶性微载体。

发明内容

本发明的目的在于克服传统技术中存在的至少一个上述问题，提供一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：

一种用于干细胞大规模培养的可溶性微载体，该可溶性微载体包含以下原料：胶原蛋白、L-谷氨酰胺、硫酸镁，氯化钙、氯化钾、丙酮酸钠、D-葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钙、L-甲硫氨酸、羟乙基哌嗪乙磺酸和水。

进一步地，所述可溶性微载体包含以下百分比的原料：10％～30％的胶原蛋白、0.001％～0.1％的L-谷氨酰胺、0.001％～0.1％的硫酸镁，0.005％～0.2％的氯化钙、0.01％～0.5％的氯化钾、0.01％～0.5％的丙酮酸钠、0.1％～1％的D-葡萄糖、0.1％～5％的碳酸氢钠、0.1％～5％氯化钙、0.01％～0.5％的L-甲硫氨酸和0.1％～5％的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，余量为水。

进一步地，所述可溶性微载体的粒径为500～800μm。

进一步地，所述可溶性微载体的内部呈有规格排列的微米多孔结构。

进一步地，所述可溶性微载体能够被胰蛋白酶消化溶解。

进一步地，所述胶原蛋白是通过微生物发酵法制备获得。

进一步地，所述可溶性微载体的制备方法包括如下步骤：

1)将胶原蛋白、L-谷氨酰胺、硫酸镁，氯化钙、氯化钾、丙酮酸钠、D-葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钙、L-甲硫氨酸、羟乙基哌嗪乙磺酸按配比加入水中，加热溶解，充分搅拌，直至所有成分完全溶解，形成半凝胶；

2)通过微流道间歇式向步骤1)得到的半凝胶中通入等量空气，形成均一气泡，气泡充满材料后停止通气；

3)等待半凝胶完全凝固，穿透贯通半凝胶内气泡，形成规格排列的微米多孔结构。

进一步地，步骤1)中，所述加热溶解的温度为130℃。