[发明专利]一种微小组织的石蜡切片的制作方法及其应用

说明书

本发明利用数码放大系统能清晰地看见微小组织样本，同时可以更好的摆正包埋位置，通过仔细操作得到理想的包埋面，为制片提供保障；通过模拟体视显微镜的数码放大效果，可以很好地解决微小组织在包埋过程中遗失、位置不正等问题，从而获得最佳的切片。

技术领域

本发明涉及微小组织病理切片的包埋和观察方法，属于病理学研究领域。

背景技术

17世纪中叶以来，显微镜开始应用于科学研究，光学显微镜中的体视显微镜由一个共用的低级物镜，利用双通道光路，为左右两眼提供一个具有立体感的图像。因其成像为正立三维像、可观察样品所有层，便于实际操作，在科研观察中得到广泛应用。

组织形态学标本制作过程中，一些较小样本的取材，我们选择在体式显微镜下操作，比如斑马鱼心脏、肝脏剥离，胎鼠样本脏器剥离等，因样本放大后有利于在不破坏原有结构的基础上进行分离取材。然而在石蜡标本制作过程中，肉眼观察常常由于微小样本特殊部位看不清导致无法精准包埋，手持放大镜一个人无法独立完成边观察边包埋，体视显微镜也无法放置于包埋机冷台边上进行观察操作。

临床外科手术标本，对于微小组织的处理一般会选择滴加伊红进行标记，以防止样本丢失，如纤维支气管镜、电子胃镜、肠镜下钳的样本，或者通过B超引导穿刺的肝、肺、前列腺等组织，这些样本的长径小于0.3cm，被称之为“微小组织”。在科研实验中，使用实验动物作为研究对象，常常会遇到更小的组织或者特定部位检材，比如观察斑马鱼眼球、心脏、胎鼠脏器、细胞球及类器官等。如何制作一张视野全面，形态俱佳的HE切片，本文进行了深入的研究并得到一些体会。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，发明人想到了模拟体视显微镜的方法，将样本放大，实时观察并操作。我们采购的电子放大镜因体积小，支架随意放置，连接手机后还可以通过手机安装APP打开并投屏在手机或者pad屏幕上进行实时观察及操作，借助显微放大技术能让我们更清晰的观察到样本的结构，一方面在取材时检材部位暴露更全面，细微结构更清晰，取材时不易被人为破坏；另一方面在包埋时可以一个人独立轻松且精准找到包埋面，解决了特殊部位包埋耗时耗人力且包埋面极容易偏离的难题，同时由于样本过小，在放大镜的观察下，组织不容易遗漏，通过高质量有效的包埋为后续染色提供了基本保障。

在样本制作过程中，全程手工操作，采用低浓度到高浓度逐渐过渡的脱水，透明浸蜡随时监控，每一个环节都需要操作者具备极强的责任心，严谨的科学态度，耐心细心，操作过程中要眼观样本，手上操作快、准、稳，这需要大量的操作经验积累。该方法利用电子放大镜的放大功能，有效解决了微小样本不利于观察，容易遗漏丢失的缺憾，省时省力，成本低廉，为科研工作者提供了便利，目前尚无相关实验方法的报道。

通过优化电子放大镜的不足，改进包埋过程中因位移造成的聚焦不清晰，我们相信利用电子放大镜完成微小组织取材包埋将会得到更广泛的推广应用，旨在为组织形态学染色的前期制备工作提供便利，为科研工作顺利开展保驾护航。

本发明的具体实施方案中，首先提供了一种微小组织样本的石蜡切片制作方法，具体包括：

1）样本处理：包括福尔马林固定、脱水、透明、浸蜡；

2）视野放大装置准备：在包埋机边上配置电子放大镜，将智能移动终端置于视野前端，并连接电子放大镜对应的应用软件，调节焦距直至显示清晰的视野图像；

3）石蜡包埋：浸蜡样本在离心管沉底并完全冷凝后，离断带样本的离心管底部放进包埋框，置于包埋机热台上，加入液体蜡，加热金属包埋框边缘，待离心管底部石蜡融化，取出样本置于包埋框中，待石蜡完全融化样本全可见；在智能移动终端应用软件中显示的视野中调整包埋面，保持位置不变的情况下将样本移至冷却台，完成包埋；