[发明专利]一种GD2嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了一种GD2嵌合抗原受体及其应用，所述人源化的GD2的scFv抗体具有结合GD2抗原的活性；所述人源化的GD2的scFv抗体的氨基酸序列与SEQ ID NO.1具有80％以上的同一性。本发明还提供了GD2嵌合抗原受体以及表达所述GD2嵌合抗原受体的嵌合抗原受体T细胞。本发明所述的人源化的GD2的scFv抗体具有更好的生物活性以及相容性；所述的GD2嵌合抗原受体与GD2结合后有更好的反应效果，免疫反应更强，且具有更好的长效性；所述的嵌合抗原受体T细胞具有更高的安全性与持久性，应用价值极高。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，尤其涉及一种GD2嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。一般情况下，嵌合抗原受体CAR由一个肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区域以及胞内信号转导区组成。通常，CAR包含抗体的单链片段可变(Single chain fragmentvariable，scFv)区或对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特异性的结合结构域，其通过铰链和跨膜区与T细胞信号传导分子的胞质结构域偶联。最常见的淋巴细胞活化部分包括与T细胞效应物功能触发(例如CD3ζ)部分串联的T细胞共刺激结构域。

CAR介导的过继性免疫疗法允许CAR移植的T细胞以非HLA限制性的方式直接识别靶肿瘤细胞上的TAA。目前，CAR-T的治疗在血液肿瘤上取得了令人振奋的效果，二代CD19CAR-T在复发难治的B系急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴白血病以及淋巴瘤上都被证实有抗肿瘤的功效，整体反应率根据肿瘤的不同约在50％～90％之间。

GD2(Disialoganglioside 2，神经节苷酯2)广泛地表现在神经母细胞瘤、黑色素瘤、脑胶质瘤与肉瘤等肿瘤当中，在正常组织中低量且局限性地表达，是一种免疫治疗理想的肿瘤抗原。目前此癌症抗原最多应用于神经母细胞瘤的治疗当中，此为儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤，其中约50％的病童发病后，即有肿瘤大规模的扩散与转移，常规的手术、化疗、放疗与自体干细胞移植对于这群病人的治疗效果有限，即使在控制病情达到缓解后，也有80％以上的病人会于一年内复发并且死亡。

目前在神经母细胞瘤的免疫治疗中，发展较为成熟的有针对GD2的抗体治疗，这一方式在临床上取得了初步的成功，但已发表的临床研究报告指出，GD2单抗治疗毒性较大，有52％的患者会产生三到四级的毒性反应，部分患者出现神经毒性。除此之外，抗体施打后存在于外周血中，较难精准地进入肿瘤组织或肿瘤微小残留的部位，且无法长期存在体内。因此，制备一种嵌合抗原受体GD2 CAR-T细胞，除了具有抗体治疗的优点，且由于T细胞本身的特性，可精准地进入肿瘤组织，并长期存在于体内，能为复发难治的神经母细胞瘤病童提供一个更有效的治疗选择。目前通过GD2 CAR-T治疗神经母细胞瘤的临床报导皆初步显示了CAR-T的有效性，但仍缺乏长期观察的数据。

目前，CAR-T技术治疗实体肿瘤的效果并不十分理想，许多CAR-T的scFv区域多从鼠源的抗体衍生而来，鼠源scFv容易遭到人类免疫系统的排斥，造成CAR-T于体内无法长期存在，从而使治疗效果受限。有报导指出，这也是许多急性淋巴细胞白血病的病人在使用CD19 CAR-T完全缓解后又复发的原因之一，且也造成了再治疗的困难性。

因此，如何提供治疗效果好、持续时间长的人源化的GD2 CAR-T，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种GD2嵌合抗原受体及其应用，含有所述的GD2嵌合抗原受体的CAR-T可以清除GD2阳性的实体肿瘤，有效清除骨髓中的微小残留，且没有发生不良反应，结合优化的T细胞讯息传导区域，提高了CAR-T的安全性、有效性、记忆性以及长期维持性。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：