[发明专利]一种受化学调控的蛋白酶工具及其配套底物

权利要求书

1.一种受化学调控的蛋白酶工具，其特征在于：所述蛋白酶工具包括HIV-1蛋白酶突变体和DmrB结构域；所述DmrB结构域通过柔性肽段与所述HIV-1蛋白酶突变体进行连接；所述HIV-1蛋白酶突变体通过对天然条件下介导HIV-1蛋白酶二聚的氨基酸位点进行突变获得。

2.如权利要求1所述的受化学调控的蛋白酶工具，其特征在于：所述HIV-1蛋白酶突变体为T96A突变体或N98D突变体；其中，所述T96A突变体为将HIV-1蛋白酶第96位的苏氨酸突变为丙氨酸的突变体；所述N98D突变体为将HIV-1蛋白酶第98位的天冬酰胺突变为天冬氨酸的突变体。

3.如权利要求1所述的受化学调控的蛋白酶工具，其特征在于：所述柔性肽段的氨基酸序列为SGGGSGGGSGGG。

4.如权利要求1所述的受化学调控的蛋白酶工具，其特征在于：所述DmrB结构域通过柔性肽段连接在所述HIV-1蛋白酶突变体的N端或C端。

5.一种如权利要求1-4任意一项所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述配套底物包括从N端到C端依次连接的Ub(R)-dK降解标签、蛋白酶工具识别切割位点、目标效应蛋白、蛋白酶工具识别切割位点和4个串联的PEST基序。

6.一种如权利要求1-4任意一项所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述配套底物包括底物蛋白，在所述底物蛋白的天然蛋白酶识别切割位点中插入蛋白酶工具识别切割位点；所述底物蛋白为天然受蛋白酶水解后激活的蛋白。

7.一种如权利要求1-4任意一项所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述配套底物包括从N端到C端依次连接的目标效应蛋白、蛋白酶工具识别切割位点和CAAX序列；其中所述CAAX序列为来自RAS2蛋白C端末尾的CAAX氨基酸基序。

8.如权利要求5-7任意一项所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述蛋白酶工具识别切割位点的氨基酸序列为VSFNFPQITL。

9.如权利要求5或7所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述目标效应蛋白为荧光蛋白、具有下游转录调控活性的转录因子或对细胞内源信号转导通路具有干扰作用的蛋白激酶中的一种。

10.如权利要求6所述的蛋白酶工具的配套底物，其特征在于：所述底物蛋白为Caspase3蛋白或Gasdermin D蛋白。