[发明专利]一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法；包括有以下方法步骤：S1、配置缓冲液实现对蜂王浆进行震荡处理；S2、将溶液一进行过滤处理；S3、将溶液二进行离心处理；S4、对离心上层液进行蛋白沉淀；S5、对获得的王浆主蛋白进行提纯处理；本发明通过缓冲液的设定实现对蜂王浆进行缓和，并且保持蜂王浆中的主蛋白活性，不会造成失活，并且截留分子量为100kDa的超滤膜实现对蜂王浆中的杂质进行有效的过滤，然后再通过离心设备和截留分子量为49kDa的超滤膜实现对蜂王浆主蛋白进行有效的粗提取，保持蜂王浆主蛋白中的杂质较少，然后再通过离子交换色谱实现对蜂王浆主蛋白进行提纯，使得蜂王浆主蛋白能够纯度较高。

技术领域

本发明属于蛋白提取纯化技术领域，具体涉及一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法。

背景技术

蜂王浆，又名蜂皇浆、蜂皇乳、蜂王乳、蜂乳，是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工蜂咽头腺的分泌物，是供给将要变成蜂王的幼虫的食物，也是蜂王终生的食物，蜂王浆的蛋白组分主要由蜂王浆主蛋白1、2、3组成，蜂王浆主蛋白1、2、3各具有独特的生理功能，均有益于人类健康。但是传统的蜂王浆主蛋白1、2、3的纯化方法主要有透析、多种层析分离方法叠加组合等，然而市面上各种的提取纯化仍存在各种各样的问题。

如授权公告号为CN103772497A所公开的蜂王浆中得到王浆主蛋白和活性滤后液的超滤膜分离方法，其虽然实现了MRJPs的提取率达到82.63％，经冷冻干燥成为蛋白含量大于70％的冻干粉；滤后液用于制备饮料，实现王浆的综合利用，但是并未解决现有蜂王浆主蛋白提取纯化存在的不能够保持蛋白的活性，以及不能够实现对主蛋白进行粗提纯和细提纯，提高主蛋白的纯度等的问题，为此我们提出一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，包括有以下方法步骤：

S1、配置缓冲液实现对蜂王浆进行震荡处理：通过氢氧化钠实现对缓冲液进行调配，然后再将蜂王浆添加进入到缓冲液中进行震荡处理，然后将蜂王浆进行静置，得到溶液一；

S2、将溶液一进行过滤处理：将S1中得到的溶液一进行过滤处理，除去溶液中的大颗粒杂质，得到过滤后的溶液二；

S3、将溶液二进行离心处理：将S2中得到的溶液二进行离心处理，并且在进行离心处理的时候，保持离心设备的处理低温环境下进行运行，然后过滤处理离心溶液的上层液；

S4、对离心上层液进行蛋白沉淀：将S3中得到的离心上层液通过PEG和防冻剂沉淀出王浆主蛋白，且在通过PEG和防冻剂处理沉淀的过程中，时刻对溶液进行搅拌处理；

S5、对获得的王浆主蛋白进行提纯处理：将S4中的得到的王浆主蛋白通过离子交换色谱进行提纯处理，通过王浆主蛋白与离子交换树脂间的相互电荷作用，实现对王浆主蛋白进行纯化与浓缩，获得纯化的王浆主蛋白。

较佳的，所述S1中的缓冲液采用的是Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH＝7.6。

较佳的，所述Tris-HCl缓冲液的配制过程如下：

先以300～500mL的重蒸水溶解60.57g Tris；

然后加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6；

然后再加重蒸水至1000mL，得储备液，于4℃冰箱中保存；用时取储备液稀释10倍，再通过氢氧化钠或者盐酸调节PH值在7.1-7.6。

较佳的，所述S1中的震荡处理时长为18-22h，且静置处理时长为1-2h，使得蜂王浆能够充分的和缓冲液进行混合，以及混合后能够实现充分的沉淀处理。