[发明专利]一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法

权利要求书

1.一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：包括有以下方法步骤：

S1、配置缓冲液实现对蜂王浆进行震荡处理：通过氢氧化钠实现对缓冲液进行调配，然后再将蜂王浆添加进入到缓冲液中进行震荡处理，然后将蜂王浆进行静置，得到溶液一；

S2、将溶液一进行过滤处理：将S1中得到的溶液一进行过滤处理，除去溶液中的大颗粒杂质，得到过滤后的溶液二；

S3、将溶液二进行离心处理：将S2中得到的溶液二进行离心处理，并且在进行离心处理的时候，保持离心设备的处理低温环境下进行运行，然后过滤处理离心溶液的上层液；

S4、对离心上层液进行蛋白沉淀：将S3中得到的离心上层液通过PEG和防冻剂沉淀出王浆主蛋白，且在通过PEG和防冻剂处理沉淀的过程中，时刻对溶液进行搅拌处理；

S5、对获得的王浆主蛋白进行提纯处理：将S4中的得到的王浆主蛋白通过离子交换色谱进行提纯处理，通过王浆主蛋白与离子交换树脂间的相互电荷作用，实现对王浆主蛋白进行纯化与浓缩，获得纯化的王浆主蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S1中的缓冲液采用的是Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH＝7.6。

3.根据权利要求2所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液的配制过程如下：

先以300～500mL的重蒸水溶解60.57g Tris；

然后加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6；

然后再加重蒸水至1000mL，得储备液，于4℃冰箱中保存；用时取储备液稀释10倍，再通过氢氧化钠或者盐酸调节PH值在7.1-7.6。

4.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S1中的震荡处理时长为18-22h，且静置处理时长为1-2h，使得蜂王浆能够充分的和缓冲液进行混合，以及混合后能够实现充分的沉淀处理。

5.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S2中的过滤处理采用的是截留分子量为100kDa的超滤膜，用于实现对溶液一中的大颗粒杂质进行过滤处理，提高溶液一的纯度。

6.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S3中的离心设备在运行使用的时候，离心速度控制在6000rpm至25000rpm，且保持在4℃的低温环境下，且对于过滤处理离心溶液的上层液采用的是截留分子量为49kDa的超滤膜进行过滤处理。

7.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S4中的PEG和防冻剂沉淀出王浆主蛋白的过程中通过伺服电机实现对溶液进行缓慢的搅拌处理，且搅拌速度在100r/min，然后再通过截留分子量为49kDa的超滤膜进行过滤处理，获得王浆主蛋白的沉淀物。

8.根据权利要求1所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述S5中的离子交换色谱在使用的时候，先将沉淀出来的王浆主蛋白加入到缓冲液中进行溶解混合，且对于王浆主蛋白的溶液过程采用低速震荡处理，保持王浆主蛋白的完整性和活性。

9.根据权利要求8所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述离子交换色谱采用的是阴离子交换柱纯化，并且通过盐浓度梯度的改变去洗脱离子交换柱，获得王浆主蛋白。

10.根据权利要求9所述的一种从蜂王浆提取纯化的王浆主蛋白的方法，其特征在于：所述离子交换色谱在使用的时候，为了实现对盐浓度进行控制调节，利用泵的辅助使流入柱的缓冲液中盐浓度平稳地上升，当离子强度能够中和蛋白的电荷时，王浆主蛋白就被从柱上洗脱下来；或者采用分步洗脱连续升高盐梯度。