[发明专利]一种淋巴细胞染色体核型制片方法

说明书

本发明公开了一种淋巴细胞染色体核型制片方法，通过在新鲜采集的血样中添加抗凝剂，接种培养后制备单细胞悬液，利用低渗液进行低渗处理，再通过核型固定液固定制片，所述的抗凝剂肝素钠和纤溶酶组成，所述的低渗液为丙三醇和KCl混合溶液，所述的核型固定液卡诺氏固定液的中添加二甲基亚砜形成。该方法通过抗凝剂和低渗液的作用提升淋巴细胞的分散程度及舒展性，固定液的快速固定作用提升染色效果，最终实现了显带条纹清晰，易于辨认的特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及细胞核型分析，特别是一种淋巴细胞染色体核型制片方法。

背景技术

染色体是细胞核中的遗传物质，血液中的淋巴细胞在一定条件下培养后，经收获、制片、胰酶消化后染色显带，可在显微镜下观察到染色体，人类有23对染色体，其中22对为常染色体，1对为决定男女性别的性染色体，染色体上载有遗传信息的基因，染色体数目增加或减少，或染色体有缺失、易位等结构异常称染色体病，可出现相应的临床症状。染色体核型分析技术是以分裂中期染色体为研究对象，根据染色体的长度、着丝点位置、长短臂比例、随体的有无等特征，并借助显带技术对染色体进行分析、比较、排序和编号，根据染色体结构和数目的变异情况来进行诊断。核型分析可以为细胞遗传分类、物种间亲缘的关系以及染色体数目和结构变异的研究提供重要依据。

目前的染色体核型分析技术主要包括细胞培养、收获、制片、显带和分析几个步骤，在此过程需要使用抗凝剂、抑制剂、低渗液、固定液和染料等试剂，由于外周血淋巴细胞样本之间存在差异，且使用的试剂种类繁多，各试剂之间或多或少都会存在相互影响，经常会出现有染色体在胞浆中无法逸出，核型偏小，染色体偏短、或染色体分散过度，无法准确计数核型，条带模糊不清，染色体的条带辨认困难等情况，导致核型分析失败，极大地影响了显带效率和分析质量。因此，染色体核型分析的准确性和成功率一直是本领域研究人员不断探索的方向。

发明内容

为了克服现有核型分析的试剂体系不稳定导致的条带模糊不清等缺陷，提高分析结果的准确性，在本发明中提供了一种淋巴细胞染色体核型制片方法，通过抗凝剂和低渗液的作用提升淋巴细胞的分散程度及舒展性，固定液的快速固定作用提升染色效果，最终实现了显带条纹清晰，易于辨认的特点。

为了实现上述技术效果，本发明具体采用以下技术方案：

一种淋巴细胞染色体核型制片方法，通过在新鲜采集的血样中添加抗凝剂，接种培养后制备单细胞悬液，利用低渗液进行低渗处理，再通过核型固定液固定制片，所述的抗凝剂肝素钠和纤溶酶组成，所述的低渗液为丙三醇和KCl混合溶液，所述的核型固定液为在卡诺氏固定液中添加二甲基亚砜形成。

进一步的，所述肝素钠的添加量为10～20IU/mL，所述纤溶酶的添加量为0.1～0.5IU/mL。

所述肝素钠用于干扰血液样本的凝血过程，在体内外都有抗凝血作用。通过与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、X、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用，阻止血小板凝集和破坏、妨碍凝血激活酶的形成、阻止凝血酶原变为凝血酶，抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而发挥抗凝作用。

所述纤溶酶具有纤维蛋白溶解活性，能够消化纤维蛋白、纤维蛋白原和V因子、VIII因子及XII因子，纤维蛋白溶解能够缓慢清除凝血块，降低血小板聚集及血液粘稠度，且降解得到的降解产物(FDP)具有抗凝作用。

所述纤溶酶与所述肝素钠配合使用从抗凝和降解两方面共同作用，不仅具有阻凝作用，还具有将凝结的血栓溶解的作用，提高了血样中淋巴细胞的分散性。

进一步的，所述丙三醇体积浓度为3％～8％，所述KCl浓度为0.05～0.1mol/Lmol/L。