[发明专利]SRSF5结合蛋白的PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于流感病毒检测技术领域，具体的，涉及一种流感病毒生命周期中与病毒RNA相互作用的关键RNA结合蛋白SRSF5的PCR检测试剂盒及检测方法。现有实时荧光定量PCR技术在检测流感病毒时通常是检测流感病毒本身，对感染的宿主的相关检测较少，还未见有检测宿主细胞中SRSF5结合蛋白的PCR技术，为此，本发明提供了一种流感病毒生命周期中关键RNA结合蛋白SRSF5的实时荧光定量PCR检测试剂盒，通过相对定量检测与流感病毒密切相关的宿主体内的SRSF5结合蛋白，来判断机体内的流感感染情况。本发明的检测试剂盒准确性好，灵敏度好，不易受到流感病毒突变的影响，适宜推广使用。

技术领域

本发明属于流感病毒检测技术领域，具体的，涉及一种流感病毒生命周期中与病毒RNA相互作用的关键RNA结合蛋白SRSF5的PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

流感病毒是一种具有高度传染性的人畜共患病病原，在世界范围内具有较高的发病率和死亡率，对全球的公共卫生安全造成了较为严重的威胁。目前控制世界各地季节性流感疫情爆发的唯一方法是疫苗，但由于流感病毒毒株经常变异，导致抗原表位预测和疫苗生产相对滞后，从而影响了疫苗的有效使用。宿主感染病毒后其先天免疫系统被激活以限制病毒复制和清除病原体，随后宿主获得性免疫参与特异性病毒清除。另外，病毒也通过多种策略避免被宿主免疫识别和消除。

流感病毒属于正黏病毒科，是一种能够感染人、禽、猪和犬，甚至是鲸鱼、貂和海豹等的有囊膜结构、分节段的负链RNA病毒。流感病毒根据M和NP抗原性的不同又可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，以及近年来新发现的丁型(D)，这四种类型的流感病毒具有不同的致病性和宿主范围。目前，以甲型流感病毒(Influenza A virus，IAV)的危害最大、流行也最为广泛，因为它不仅能够给畜禽养殖业带来巨大的经济损失，而且能够跨物种传播感染并致死哺乳动物，全世界每年因流感病毒感染导致的死亡人数在29万到65万之间，这给公共卫生安全带来极大的威胁。另外，在免疫压力的作用下流感病毒的抗原性不断发生变异，从而逃逸宿主的免疫监视，产生新的流行毒株。近年来,多种禽流感病毒的出现及其在世界范围内的流行,导致人感染禽流感病毒的病例增加,加剧了禽流感病毒的公共卫生学危害，特别是H5、H7和H9亚型。

由于流感病毒经常变异，导致抗原表位预测和疫苗生产相对滞后，从而影响了疫苗的有效使用。此外，一些抗病毒药物的使用，包括金刚烷胺和神经氨酸酶抑制剂等，导致禽流感病毒的耐药性正在不断增强。由于流感病毒需要利用宿主的转录翻译系统进行复制，所以宿主蛋白在流感病毒维持其生命周期及致病性中具有非常重要的作用。

实时荧光定量PCR技术是美国Applied Biosystems公司在1996年研发出来的一种新技术，此种技术不但能够解决PCR污染的问题，还具有较高的自动化程度以及较强的特异性。采用此种技术对流感病毒进行检测诊断时，由于将实时PCR技术与逆转录技术结合了起来，因此被叫做定量“RT-PCR”技术。结合起来的这种技术能够用少量的RNA识别出在某个特定时间、细胞以组织内的特定基因，将此种技术应用在检测流感病毒检测诊断的临床上，为提高诊断准确性提供了可靠的依据。

实时荧光定量PCR技术是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测来实现了对起始模板定量以及定性的分析，在这个扩增反应中，将荧光化学物质引入其中，荧光强度的信号会随着扩增反应的进行而逐渐加强，此时所监测到的信号就可以绘制成一条曲线，然后对未知模板进行定量分析。在实际检测的过程中，既有特异性引物存在，还有核苷酸探针存在，其目的都是在进行扩增反应时，利用聚合酶的活性将探针进行水解，使其水解成单核苷酸，此时有力的荧光报告基因导致的荧光信号的增加，就会通过荧光信号强度进行的实时动态进行检测，从而达到对扩增反应产物进行定量的分析。