[发明专利]一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于植物病毒检测技术领域，具体涉及一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体及其制备方法和应用。本发明要解决的技术问题是为TYMaV的检测提供一种新选择。本发明还提供了一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体，该抗体以TYMaV的核衣壳N基因的编码蛋白为抗原制备得到。本发明还进一步提供了所述抗体的制备和应用方法。本发明克隆了番茄黄化斑驳相关病毒的核衣壳N基因序列，并对序列进行了分析和实验，获得了可用于制备番茄黄化斑驳相关病毒检测抗体的抗原序列。利用该抗体可以快速准确检测番茄及其他感病样品中的番茄黄化斑驳相关病毒，为番茄黄化斑驳相关病毒的监测、诊断及致病机制研究具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于植物病毒检测技术领域，具体涉及一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体及其制备方法和应用。

背景技术

番茄是全世界范围内重要的蔬菜和水果作物，同时也被广泛应用于生物和非生物胁迫科学研究。在番茄生产过程中，病毒病是为害番茄的主要病害之一，病毒病具有种类多、变异快、防控难的特点，快速准确鉴定出病毒种类对番茄病毒病的防控具有重要作用。

番茄黄化斑驳相关病毒 (tomato yellow mottle-associated virus, TYMaV)是近几年在番茄上刚发现的新病毒，造成番茄叶片卷曲、皱缩、黄化斑驳等症状，影响了番茄的生长及产量 （Xu et al. Journal of Virology, 2017, 91 (11):e00173-17）。TYMaV是胞质弹状病毒属病毒，其基因组为13000 nt左右的负义单链RNA。除了可以侵染番茄，TYMaV的其他寄主目前暂无报道，TYMaV的传播方式也未知。对TYMaV的检测方式仅限于RT-PCR，无抗原抗体相关检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为TYMaV的检测提供一种新选择。

本发明还提供了一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体，该抗体以TYMaV的核衣壳N基因的编码蛋白为抗原制备得到。

进一步的，所述TYMaV的核衣壳N基因序列的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.2第213～412位所示。

具体的，TYMaV的核衣壳N基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1第637～1236位或SEQID No.5所示。

本发明还提供了所述抗体的制备方法，包括如下步骤：将SEQ ID No.1第637～1236位或SEQ ID No.5所示核苷酸克隆到原核表达载体上，转化大肠杆菌，收集表达蛋白；以表达蛋白为免疫原对模式动物三次免疫注射，在第一次免疫一个月后开始收集血清，分离纯化得到抗体。

本发明还提供采用所述抗体检测番茄黄化斑驳相关病毒的方法，包括如下步骤：包括如下步骤： 样品制备，SDS-PAGE电泳，转膜至硝酸纤维素膜上，封闭，一抗反应，二抗反应，显色，检测。

具体的，在一抗反应中，在封闭液中按照1︰2000稀释比例加入抗体。

其中，在二抗反应中，按1︰10000比例稀释比例加入羊抗兔HRP二抗。

本发明的有益效果：本发明克隆了番茄黄化斑驳相关病毒的核衣壳N基因序列，并对序列进行了分析和实验，获得了可用于制备番茄黄化斑驳相关病毒检测抗体的抗原序列。并进一步纯化核衣壳蛋白并制备核衣壳蛋白多克隆抗体，利用该抗体可以快速准确检测番茄及其他感病样品中的番茄黄化斑驳相关病毒，为番茄黄化斑驳相关病毒的监测、诊断及致病机制研究具有重要的应用价值。

附图说明

图1、N蛋白二级结构分析。

图2、N蛋白亲疏水性、抗原性分析。

图3 、蛋白小量纯化表达检测结果，M为Marker，1为未诱导对照（BL21），2和3为IPTG诱导的pET30a-N（213～412）。