[发明专利]一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202210183324.8 | 申请日： | 2022-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN114230661B | 公开（公告）日： | 2022-05-03 |
| 发明（设计）人： | 李正刚;何自福;汤亚飞;佘小漫;于琳;蓝国兵 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/06;C12N15/40;C07K14/08;G01N33/569;G01N33/548 |
| 代理公司： | 重庆律知诚专利代理事务所(普通合伙) 50281 | 代理人： | 殷兴旺;王俊超 |
| 地址： | 510640 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 番茄 黄化 斑驳 相关 病毒 检测 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于番茄黄化斑驳相关病毒检测的抗体，其特征在于，该抗体以TYMaV的核衣壳N基因的编码蛋白为抗原制备得到；所述TYMaV的核衣壳N基因序列的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2第213～412位所示，TYMaV的核衣壳N基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1第637～1236位或SEQ ID No.5所示；所述抗体的制备方法，包括如下步骤：将SEQ ID No.1第637～1236位或SEQ ID No.5所示核苷酸克隆到原核表达载体上，转化大肠杆菌，收集表达蛋白；以表达蛋白为免疫原对模式动物进行三次免疫注射，在第一次免疫一个月后开始收集血清，分离纯化得到抗体。
2.采用权利要求1所述抗体检测番茄黄化斑驳相关病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤： 样品制备，SDS-PAGE电泳，转膜至硝酸纤维素膜上，封闭，一抗反应，二抗反应，显色，检测；一抗为权利要求1所述抗体，所述二抗为羊抗兔HRP。
3.如权利要求2所述方法，其特征在于，在一抗反应中，在封闭液中按照1︰2000稀释比例加入抗体。
4.如权利要求3所述方法，其特征在于，在二抗反应中，按1︰10000比例稀释比例加入羊抗兔HRP二抗。
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