[发明专利]293细胞的转染方法

说明书

本发明公开了293细胞的转染方法，包括以下步骤：将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1×10⁵cells/mL～5×10⁷cells/mL；将转染后的293细胞接种到转染培养基进行培养，所述转染培养基中含有L‑酪氨酸、烟酰胺、硫酸镁和氢化可的松，流式电转染条件和转染后营养环境相互配合，可使细胞的转染损伤修复并获得更好的生长环境，实现较高的基因表达强度、细胞密度和细胞存活率。

技术领域

本发明涉及转染培养基技术领域，具体涉及一种293细胞的转染方法。

背景技术

在生物药物研发中，采用较多的是将目的基因质粒转染入宿主细胞进行培养，以期获得目标生物药物。流式电转技术是一种高效的转染技术，在较低电压下即能产生足够强度的均匀电场，可实现高转染率。转染培养基能更好的保护细胞、降低细胞死亡率的同时，显著提高细胞转染率。最初大量使用的宿主细胞是原核表达体系，真核表达体系由于技术问题导致应用受限，不及原核表达体系。近年来，由于技术的进步，加之真核表达体系具有的特有优势，在部分领域开始取代原有的原核体系。例如一些研究机构使用真核293细胞用于生产蛋白药物或其他生物药物。

293细胞(人胚肾细胞，又称为HEK细胞)比较容易转染，是一种很常用的表达研究外源基因的细胞株。而且由于293细胞对蛋白的翻译和修饰功能，使该药物的活性的效价会更好。由于真核细胞和原核细胞的结构区别，使其培养的条件适应性并不相同，所需的转染条件不同，原核细胞转染条件并不适合真核细胞。由于细胞转染过程会引发细胞膜表面的变化，对细胞造成刺激，细胞在转染后是比较脆弱的，转染后细胞的修复和转染物质的表达对于培养环境的要求较高。除了细胞的生长健康状态，不同的转染方法、条件和转染后的培养方法对于转染的效果也起着重要作用。市场上对于真核细胞转染的研究非常有限，尤其是针对真核细胞的流式电转方案的开发更是少之又少。

鉴于此，开发适用于293细胞的流式电转方案很有必要。

发明内容

基于此，本发明提供一种能够实现高效转染的流式电转方法转染293细胞。

本发明的目的在于提供一种293细胞的转染方法，包括以下步骤：

将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1×10⁵cells/mL～5×10⁷cells/mL；

将转染后的293细胞接种到转染培养基进行培养，所述转染培养基中含有L-酪氨酸、烟酰胺、硫酸镁和氢化可的松。

在其中一个实施例中，所述流式电转转染的电压值为160V～250V，脉冲值为1000μs～2000μs，电击次数为3～6次，间隔为200ms～400ms，转染液流速为3.5mL/min～5.5mL/min。

在其中一个实施例中，转染时的所述293细胞的细胞密度为1×10⁶cells/mL～5×10⁷cells/mL。

在其中一个实施例中，所述转染培养基为无血清转染培养基，所述转染培养基包含如下浓度的组分：

L-酪氨酸 0.1843g/L～0.396g/L、

天冬酰胺 0.1704g/L～0.1874g/L、

L-胱氨酸 0.3361g/L～0.3697g/L、