[发明专利]一种信号肽及促进胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中分泌表达的方法

权利要求书

1.可向胞外分泌具有三股螺旋结构的胶原蛋白的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌表达了依次为Signal区域、胶原蛋白的序列；其中，Signal区域为SEQ ID NO.3~5任一所示序列编码的信号肽，所述胶原蛋白的序列如SEQ ID NO.9所示。

2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌，其特征在于，以pXMJ19系列质粒为表达载体。

3.一种促进谷氨酸棒杆菌向胞外分泌表达带有三股螺旋结构的胶原蛋白的方法，其特征在于，将信号肽添加至编码胶原蛋白的序列的上游；所述信号肽的核苷酸序列分别如SEQID NO.3~5所示；所述编码胶原蛋白的序列如SEQ ID NO.9所示。

4.应用权利要求1或2所述谷氨酸棒杆菌生产胶原蛋白的方法，其特征在于，将所述谷氨酸棒杆菌接种至发酵培养基中，在27~28.5℃培养24~64 h。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括（a）~（d）的至少一项操作：

（a）培养至发酵液OD₆₀₀为2~14时用IPTG进行诱导；

（b）以终浓度0.2~1.1 mmol/L加入IPTG诱导；

（c）在27~28.5℃用IPTG诱导24~64 h；

（d）提高发酵过程的溶氧。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述提高发酵过程的溶氧包括：在含挡板的容器中发酵，和/或控制发酵培养基的装液量为发酵容器容积的10~20%。

7.根据权利要求4~6任一所述的方法，其特征在于，用于发酵的培养基按g/L计含有：(NH4)₂SO₄ 20，玉米浆干粉20，K₂HPO₄ 1，KH₂PO₄ 1，MgSO₄ 0.25，3-（N-吗啉基）丙磺酸钠盐42，葡萄糖20。

8.权利要求1~2任一所述的谷氨酸棒杆菌，或权利要求3~7任一所述的方法在生物、食品或化工领域制备胶原蛋白中的应用。