[发明专利]一种秀珍菇RNA病毒检测引物组及检测方法

说明书

本发明提供了一种秀珍菇RNA病毒检测引物组及检测方法，属于生物技术领域。所述检测引物组选自引物组Plp_vir1或引物组Plp_vir2，引物组Plp_vir1序列如SEQ ID NO.1~2所示，引物组Plp_vir2序列如SEQ ID NO.3~4所示。所述检测方法为提取待测秀珍菇样品的总RNA，反转录成cDNA，然后以反转录的cDNA为模板，以引物组Plp_vir1或引物组Plp_vir2进行RT‑PCR扩增，凝胶电泳检测扩增产物，并对电泳结果进行判断，确定待测秀珍菇样品是否携带RNA病毒。本发明结果判定简单，操作便捷，成本低，具广泛应用前景。

技术领域

本发明涉及一种秀珍菇RNA病毒检测方法，具体涉及一种秀珍菇RNA病毒的检测引物组及检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

秀珍菇 Pleurotus pulmonarius是20世纪90年代由中国台湾等地发现将凤尾菇的采收时间适当提前，其风味异常鲜美，并经过品种选育和栽培工艺的改进而开发的新品种，1998年林俊仁先生从中国台湾引进，在福建省罗源县试种成功后，逐渐向全国推广。秀珍菇是高温型的菌类，并且其子实体朵形优美，口感俱佳，不仅营养价值高，还有较高的药用价值，深受人们的喜爱，在全国有很好的种植基础，特别是近年来其菇价一直较高，多地已掀起了种植秀珍菇的热潮。

然而高温季节出菇也容易受到病虫害等的侵染，给生产带来严重的威胁。其中病毒的入侵将给秀珍菇生产带来无法预测的影响：由于形态微小，肉眼看不到，同时其可以潜伏在菌丝中，只有在子实体出现畸形后才被发现，此时对产量和质量已造成不可挽回的损失。此外，病毒还可以通过垂直传播给下一代，影响菌种质量。感染病毒的秀珍菇，将使幼小子实体发黄，并产生畸形（图1），严重的使子实体发黄、萎蔫而绝收（图2）。因此，如何在早期鉴别菌丝体是否感染了病毒至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种秀珍菇RNA病毒的检测引物组和检测方法。通过设计秀珍菇RNA病毒基因的特异引物，建立秀珍菇RNA病毒的分子检测方法，为方便、快速、有效地检测秀珍菇菌种及子实体是否携带病毒提供技术支撑。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明首先提供了一种秀珍菇RNA病毒的检测引物组，所述检测引物组选自以下引物Plp_vir1或引物Plp_vir1：

引物组Plp_vir1：

正向引物序列：5'-TTTCCGATCAGGCCAATGAG-3'，

反向引物序列：5'-CCGCAGTTCCAGCCAAATAG-3'；

引物组Plp_vir2：

正向引物序列：5’-CCAACGCTTTGTCCGCATTC-3’，

反向引物序列：5’-ATGACGCCATATCCAAGTCC-3’。

其次，本发明还提供了一种秀珍菇RNA病毒的检测方法，首先提取待测秀珍菇样品的总RNA，通过反转录成cDNA，以反转录的cDNA为模板，再以上述的检测引物组作为引物进行RT-PCR扩增，凝胶电泳检测扩增产物，并对电泳结果进行判断，确定待测秀珍菇样品是否携带RNA病毒。

进一步的，上述一种秀珍菇RNA病毒的检测方法具体包括以下步骤：

（1）提取待测秀珍菇样品的总RNA；

（2）将步骤（1）提取的秀珍菇总RNA反转录成cDNA；

（3）以步骤（2）所得cDNA为模板，建立秀珍菇RNA病毒的RT-PCR检测；