[发明专利]一种秀珍菇RNA病毒检测引物组及检测方法有效
| 申请号： | 202210171296.8 | 申请日： | 2022-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN114438264B | 公开（公告）日： | 2023-07-21 |
| 发明（设计）人： | 刘新锐;邓优锦;陈炳智;吴小平 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/92 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 林文弘;蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 秀珍菇 rna 病毒 检测 引物 方法 | ||
1.一种秀珍菇RNA病毒的检测引物组，其特征在于：所述检测引物组选自以下引物组Plp_vir1或引物组Plp_vir2：
引物组Plp_vir1：
正向引物序列：5'-TTTCCGATCAGGCCAATGAG-3'，
反向引物序列：5'-CCGCAGTTCCAGCCAAATAG-3'；
引物组Plp_vir2：
正向引物序列：5’-CCAACGCTTTGTCCGCATTC-3’，
反向引物序列：5’-ATGACGCCATATCCAAGTCC-3’。
2.一种秀珍菇RNA病毒的检测方法，其特征在于：首先提取待测秀珍菇样品的总RNA，通过反转录成cDNA，然后以反转录的cDNA为模板，以权利要求1所述的检测引物组作为引物进行RT-PCR扩增，凝胶电泳检测扩增产物，并对电泳结果进行判断，确定待测秀珍菇样品是否携带RNA病毒。
3.根据权利要求2所述的秀珍菇RNA病毒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）提取待测秀珍菇样品的总RNA；
（2）将步骤（1）提取的秀珍菇总RNA反转录成cDNA；
（3）以步骤（2）所得cDNA为模板，建立秀珍菇RNA病毒的RT-PCR检测；
PCR扩增体系总体积25μl：cDNA模板1.5～3μl，Premix Taq 12.5μl ，10 μmol/L正向引物1μl，10 μmol/L反向引物1μl，ddH2O 7.5～9μl；
PCR扩增反应程序：94℃预变性5min；98℃变性10sec，56℃退火30sec，72 ℃延伸45sec, 30～35个循环；72 ℃延伸10min；
根据凝胶电泳检测的DNA图谱，若用引物组Plp_vir1扩增出563 bp的特异DNA条带，或用引物组Plp_vir2扩增出521 bp的特异DNA条带，则表示待测秀珍菇样品携带RNA病毒，若采用引物组Plp_vir1和引物组Plp_vir2均未扩增出特异DNA条带，则表示待测秀珍菇样品不携带RNA病毒。
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