[发明专利]大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原、合成方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种大鼠细小病毒RPV‑1特异性VP2基因重组抗原、合成方法及试剂盒，大鼠细小病毒RPV‑1特异性VP2基因重组抗原氨基酸序列为SEQ ID NO：1。本发明的大鼠细小病毒RPV‑1特异性VP2基因重组抗原，选用大鼠细小病毒VP2蛋白上的特异性序列段201‑450aa片段，并制备成抗原，同时建立了间接ELISA方法，实现低成本、高特异性且更安全的ELISA检测。本发明的大鼠细小病毒RPV‑1特异性基因重组抗原，能用于大鼠细小病毒的间接ELISA试剂盒或大鼠细小病毒的免疫学试剂盒，能对大鼠细小病毒RPV‑1进行单独检测，能避免与KRV和H‑1阳性血清的交叉反应，检测的准确性高，且与病毒分离培养和观察鉴定的检测方法相比，检测效率高，检测操作简便，检测成本低。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，特别是一种大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原、合成方法及试剂盒。

背景技术

RPV-1属于细小病毒科、细小病毒属，为单链负链DNA病毒，无囊膜，基因组约5kb。基因组编码2个非结构蛋白(NS)和2个衣壳蛋白(VP)。2个衣壳蛋白VP1和VP2具有血清型特异性，VP2是主要的衣壳蛋白，其基因序列位于VP1基因序列区内。第三个衣壳蛋白VP3由VP2裂解产生。一般所指的大鼠细小病毒（Rat parvovirus，RPV）包括RPV-1、RV(KRV)、H-1三种血清型，每个血清型包含多个分离株。与KRV和H-1相比，RPV-1感染大鼠并不表现任何临床症状和组织损害。但是RPV-1可污染肿瘤移植、细胞系和环境，对试验研究产生干扰。

目前对大鼠RPV-1抗体检测方法包括ELISA和免疫荧光，不足之处是因RPV-1、RV(KRV)、H-1三种血清型有交叉，通常是对这3种血清型合并检测，不能区分感染的是哪一株。

病毒分离培养和观察鉴定被认为是病原微生物检测的“金标准”，但缺点是检测周期长，速度慢，对操作要求较高且成本也高。

2018年，霍娜等在《中国动物传染病学报》发表的“大鼠细小病毒VP2原核表达及间接ELISA方法建立”，文章选取了的RPV株VP2蛋白上长度为378bp的特异性序列（相应氨基酸序列为VP2蛋白15-140aa片段），随后构建了pET30a原核表达体系，以纯化后的表达产物为抗原，建立间接ELISA方法。结果显示，与KRV和H-1阳性血清存在交叉反应，因而，该方法仍然不能实现病毒的RPV-1、RV(KRV)、H-1三种血清型的分离检测。

发明内容

本发明的第一个目的在于针对背景技术中所述的现有技术中对大鼠RPV-1抗体检测方法，不能实现与KRV和H-1阳性血清的分离检测，而病毒分离培养和观察鉴定被认为是病原微生物检测的“金标准”，但这种方法检测周期长，速度慢，对操作要求较高且成本也很高等问题，提供一种能够解决前述问题的大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

本发明的第二个目的在于提供一种大鼠细小病毒的间接ELISA试剂盒，包含有上述的大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原。

本发明的第三个目的在于提供一种大鼠细小病毒的免疫学试剂盒，包含有上述的大鼠细小病毒RPV-1特异性VP2基因重组抗原。

本发明的第四个目的在于提供一种大鼠细小病毒RPV-1重组蛋白的合成方法，其包括以下步骤：