[发明专利]一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有多重PCR引物组。所述的多重PCR引物组由1条通用上游引物，和分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ以及ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物组成，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，分别用于扩增ARV‑Ⅰ、ARV‑Ⅰ‑sub、ARV‑Ⅱ、ARV‑Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2‑5所示。实验结果表明，该方法敏感性高，特异性良好，对人工感染动物试验样品检测结果表明，mPCR与常规PCR方法检测结果一致，符合率为100％，适用于禽病毒性关节炎临床诊断、流行病学调查以及临床监测工作。

技术领域

本发明涉及一种多重PCR试剂盒及其应用，特别涉及一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR试剂盒及其应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

鸡病毒性关节炎是由禽呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)感染导致的一种以鸡关节肿胀、跛行等为主要特征的禽免疫抑制病。近年来，ARV感染和流行情况呈不断加重的趋势，并且传播速度快、波及范围广，病鸡感染后表现关节肿胀、腱鞘炎、跛行等症状，ARV感染可诱发免疫抑制，增强感染鸡群继发其他疾病的易感性，常引起混合感染或继发感染，死亡率高达30％～50％，给我国养鸡业带来了严重的经济损失。

ARV是无囊膜的dsRNA病毒，其基因组由10个节段组成。其中S1基因编码的σC蛋白是病毒的外衣壳蛋白和主要保护性抗原，与ARV的感染、致病性和抗原变异关系密切。σC蛋白编码基因可作为ARV流行毒株分型的依据，根据其遗传进化分析结果，ARV分离株可分为6种基因型，其中基因Ⅰ型、基因Ⅰ亚型、基因Ⅱ型和基因Ⅴ型ARV为我国ARV流行的优势基因型。临床样品检测发现，同一个养殖场不同基因型毒株共感染或混合感染现象较为常见，因此，建立一种高效、快速的鉴别诊断方法是十分必要的。

ARV特异性抗原检测方法是我国目前临床上比较常用的抗原检测方法，但该方法不能区分病毒基因分型，且检测结果假阳性率比较高。而像荧光定量、间接免疫荧光实验、病毒分离等抗原检测方法，因其操作繁琐、对实验仪器要求高、耗时长的局限性，也不利于大批量样品的检测。

本发明建立并优化了一个用于区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR检测方法，该多重PCR检测方法快速、特异性好、敏感性高，适用于禽病毒性关节炎临床诊断、流行病学调查以及临床监测工作。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR引物组；

本发明的目的之二在于提供一种含有上述多重PCR引物组的，用于检测或区分4种不同禽呼肠孤病毒基因型的多重PCR试剂盒；

本发明的目的之三在于提供上述多重PCR引物组和试剂盒在检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型中的用途。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种用于检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的多重PCR引物组，所述的多重PCR引物组由1条通用上游引物mGC-F，和分别用于扩增ARV-Ⅰ、ARV-Ⅰ-sub、ARV-Ⅱ以及ARV-Ⅴ特异性基因区域的4条特异性下游引物mGC1-R、mGC1-sub-R、mGC2-R以及mGC5-R组成，其中上游引物mGC-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，4条特异性下游引物mGC1-R、mGC1-sub-R、mGC2-R以及mGC5-R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2-5所示。

进一步的，本发明还提出了所述的多重PCR引物组在制备检测或区分禽呼肠孤病毒4种不同基因型的试剂中的用途，所述的ARV 4种不同基因型包括ARV-Ⅰ、ARV-Ⅰ-sub、ARV-Ⅱ以及ARV-Ⅴ。