[发明专利]一种CAR细胞疗法用核酸构建体及其慢病毒载体、细胞制剂和应用

权利要求书

1.一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：包括依次串连的信号肽、抗原结合区、胞外铰链区、跨膜结构域和胞内信号域；

所述信号肽为Human IgKVIII、Human IL-2或Human insulin；

所述抗原结合区为anti-CD19 scFv、anti-Her-2scFv、anti-ROR1 scFv或anti-BCMAscFv；

所述胞外铰链区为来自CD8、CD28、CTLA4、PD-1、NKG2D、IgG1、含CH2CH3区域的IgG4或不含CH2CH3区域的IgG4的铰链区序列；

所述跨膜结构域为来自T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、DAP10、DAP12、NKG2A、NKG2D、PD-1或CTLA的跨膜结构域序列；

所述胞内信号域由DAP10 CD、CD137 CD和CD3ζSD所组成。

2.如权利要求1所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述信号肽为CD8SP，所述CD8 SP的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述抗原结合区为Her-2scFv，所述Her-2scFv的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所示。

4.如权利要求1所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述胞外铰链区为CD8 H、CD28 H或IgG4 H-CH2-CH3，所述CD8 H的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，所述CD28H的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述IgG4 H-CH2-CH3的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

5.如权利要求1所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述跨膜结构域为CD8 TMD、CD28 TMD或NKG2D TMD，所述CD8 TMD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，所述CD28 TMD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，所述NKG2D TMD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。

6.如权利要求1所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述DAP10 CD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，所述CD137 CD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，所述CD3ζSD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示。

7.如权利要求6所述的一种CAR细胞疗法用核酸构建体，其特征在于：所述胞内信号域的顺序为DAP10 CD-CD137 CD-CD3ζSD，所述DAP10 CD-CD137CD-CD3ζSD的核酸序列和多肽序列分别如序列表中的SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示。

8.一种慢病毒载体，其特征在于：所述慢病毒载体包含如权利要求1至7中任一项所述的CAR细胞疗法用核酸构建体的基因。

9.一种细胞制剂，其特征在于：所述细胞制剂为导入有权利要求8所述的慢病毒载体的免疫效应细胞，所述免疫效应细胞为T细胞、NK细胞或巨噬细胞，所述免疫效应细胞的来源为自体、同种异体、干细胞分化或特定细胞系。

10.如权利要求9所述的一种细胞制剂在癌症治疗中的应用。