[发明专利]一种一步法核酸检测方法及其所用的密封性核酸检测装置

说明书

本发明涉及一种一步法核酸检测方法及其所用的密封性核酸检测装置，该密封性核酸检测装置，主体为PCR管，包括管盖、管体，管体内分为三层，最下层为PCR冻干试剂层，是将PCR冻干试剂密封在第一石蜡层中构成；中间层为盐酸溶液；最上层为核酸提取试剂层，核酸提取试剂层与盐酸溶液之间通过第二石蜡层隔离；核酸提取试剂层中放置核酸检测所需的一步法核酸提取试剂。本发明实现同一PCR管内的空间隔离，做到只需一次加样，即可完成PCR检测，无需中间繁琐的核酸提取过程和核酸加样操作，反应完成后，也无需开盖分析，核酸提取和检测过程做到真正的零污染，且整个过程操作简单，大大降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域中的体外诊断领域，具体涉及一种一步法核酸检测方法及其所用的密封性核酸检测装置。

背景技术

病原微生物感染一直威胁着人类的生命健康。尤其是烈性传染性强的病原微生物感染，会给人类生命健康带来不可估量的损失。随着人口密度的不断上升，各种呼吸道病原微生物，食源性致病微生物的传播变得越来越广泛。随着医疗技术的发展以及对于精准、快速的疾病诊断的需求，分子生物学检测技术被越来越多的运用于病原体的鉴定中。

传统的病原微生物鉴定常用分离培养的方法，该方法耗时较长，成本较高，且最终的鉴定结果不够精准，同时该技术的危险性较高，对操作人员的技术要求非常严苛。聚合酶链式反应（Ploymerase Chain Reaction，PCR），一种基于病原微生物基因组核酸的分子检测技术，具有准确性高，耗时短，成本低，操作简便等特点。荧光定量PCR（qRT-PCR）是在PCR的基础上，引入荧光物质，通过对荧光信号的实时采集，完成对扩增过程的实时监测，同时可以对病原微生物进行定量的一种分子检测技术，无需再次开盖分析，比PCR更适合于病原微生物的检测。因此，qRT- PCR被越来越多的应用到医疗卫生，食品病原微生物的检测，环境致病菌的监测等领域，尤其是在一些稀有致病菌的鉴定上更为常用。

qRT-PCR反应是以病原微生物的DNA（或cDNA）为基础进行扩增反应，常规的qRT-PCR检测需要专门的核酸提取过程，再将提纯后的核酸物质加到PCR反应液中，进行扩增检测。常见的核酸提取试剂多为胍盐等蛋白强变性剂和醇类等有机试剂，去除不彻底将会抑制后续的PCR检测反应，导致反应失败。且过程耗时较长，步骤繁琐。这种繁琐的核酸提取过程，降低了检测效率，且核酸提取和检测分别在不同的管中进行，容易造成核酸污染，引起假阳性的检测结果。同时，需要对检测环境进行严格的分区，严格的环境气流控制，大大增加了检测的成本和难度。

现在市面上有一些快速核酸提取的产品，一些产品需要加热辅助提取，该种方法极易产生核酸气溶胶污染环境；也有一些产品无需加热辅助提取，但样本核酸提取和检测在两个不同的管内进行，需要提取后将核酸加到PCR反应液中，该过程也是极易污染实验环境，造成检测结果的不准确。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种一步法核酸检测方法，及为配合该方法专门设计的密封性核酸检测装置。

本发明提供的密封性核酸检测装置，主体为PCR管，包括管盖、管体，所述管体内分为三层，最下层为PCR冻干试剂层，是将所述PCR冻干试剂密封在第一石蜡层中构成；中间层为盐酸溶液；最上层为核酸提取试剂层，所述核酸提取试剂层与盐酸溶液之间通过第二石蜡层隔离；所述核酸提取试剂层中放置核酸检测所需的一步法核酸提取试剂。

进一步，所述盐酸溶液中盐酸溶液的体积为20-40μl，浓度为150mM-200mM。

进一步，所述核酸提取试剂层中的一步法核酸提取试剂的体积为10-20μl。

进一步，所述第二石蜡层的厚度为0.2-0.4 mm。