[发明专利]一种一步法核酸检测方法及其所用的密封性核酸检测装置

权利要求书

1.一种密封性核酸检测装置，主体为PCR管，包括管盖（1）、管体（2），其特征在于，所述管体（2）内分为三层，最下层为PCR冻干试剂层，是将所述PCR冻干试剂（3）密封在第一石蜡层（4）中构成；中间层为盐酸溶液（5）；最上层为核酸提取试剂层（7），所述核酸提取试剂层（7）与盐酸溶液（5）之间通过第二石蜡层（6）隔离；所述核酸提取试剂层（7）中放置核酸检测所需的一步法核酸提取试剂。

2.根据权利要求1所述密封性核酸检测装置，其特征在于，所述盐酸溶液（5）的体积为20-40μl，浓度为150mM-200mM。

3.根据权利要求2所述密封性核酸检测装置，其特征在于，所述核酸提取试剂层（7）中的一步法核酸提取试剂的体积为10-20μl。

4.根据权利要求3所述密封性核酸检测装置，其特征在于，所述第二石蜡层（6）的厚度为0.2-0.4 mm。

5.根据权利要求1-4任一所述密封性核酸检测装置，其特征在于，制备时的步骤为：在一个常规PCR管内，先加入PCR冻干试剂，然后第一次加入石蜡液体形成第一石蜡层，密封PCR冻干试剂，待第一石蜡层凝固后，再在第一石蜡层上方加入盐酸溶液，然后再在盐酸溶液上方第二次加入石蜡形成第二石蜡层，待第二石蜡层凝固后在上方加入一步法核酸提取试剂，盖上PCR管盖备用。

6.一种一步法核酸检测方法，其特征在于，使用权利要求1-4任一所述的密封性核酸检测装置进行操作，包括如下步骤：

S1、取待测样本加入到所述密封性核酸检测装置的核酸提取试剂层（7）中，盖紧管盖（1），晃动管体（2），使待测样本和一步法核酸提取试剂充分混匀，室温静置10-20分钟；

S2、将上述密封性核酸检测装置加热到45-55℃，持续2-8分钟，使第一石蜡层（4）和第二石蜡层（6）充分融化；

S3、用离心力1000-3000g对上述密封性核酸检测装置进行离心，石蜡溶液充分悬浮到反应液的上方；

S4、混匀管体中的反应液，使反应液充分溶解管体最底层的PCR反应冻干试剂，完全溶解后，1000-2000 g离心5-15秒；

S5、将上述密封性核酸检测装置直接放入荧光定量PCR仪器中进行扩增操作。

7.根据权利要求6所述一步法核酸检测方法，其特征在于，所述一步法核酸提取试剂的组分及占比如下：

牛血清白蛋白的质量比为1‰～10‰；

甜菜碱的质量比为1%～10%；

曲拉通X-100的体积比为1‰～20‰；

吐温20的体积比为1‰～10‰；

Tris-HCl的浓度为10mM～100mM；

EDTA-Na2的浓度为1mM～50mM；

氯化钾的浓度为1mM～20mM；

醋酸钠的浓度为10mM～20mM；

聚乙二醇的体积比为1‰～10‰；

氢氧化钠的浓度为10mM～500mM；

以上质量比、体积比以及浓度都是指该组分在一步法核酸提取试剂中的占比。

8.根据权利要求7所述一步法核酸检测方法，其特征在于，所述一步法核酸提取试剂中还包括蛋白酶K，所述蛋白酶K的质量比为0.1‰～10‰。