[发明专利]一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法，包括以下步骤，采集健康的脐带血，并采用血液分析仪进行培养，对培养后的脐血进行CIK细胞计数；用淋巴细胞分离液分离单个核细胞；把所得单核细胞悬浮在CIK细胞无血清培养液中，形成混合液；在步骤S3所得的混合液中添加添加IL‑2、干扰素与CD3单抗，并在CO2孵箱中通过37℃的温度培养14‑18天，得到最终培养液；将步骤S4收集到最终培养的上清液经过3000r，20min离心去细胞碎片及颗粒，再进行10KD超滤,最终获得白细胞提取物。该用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法，在实际的使用过程中具有良好的安全性，在对皮肤抑菌、消炎、修复效果明显，同时还具备了较强的修复能力。

技术领域

本发明涉及生物化妆品技术领域，具体为一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法。

背景技术

所谓CIK细胞，就是将白细胞(血液中单个核细胞)在体外用多种细胞因子，如抗CD3单抗、白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)共同培养一段时间后获得的，具有非主要组织相容性抗原(MHC)限制性杀瘤活性的一群异质细胞。

不同来源的CIK细胞的扩增速度、杀瘤活性及杀瘤机制都存在一定的差别。脐血CIK的细胞增殖能力及细胞杀伤能力均较外周血CIK强，两类CIK细胞作用于肿瘤细胞后均出现凋亡和坏死两种变化，不同的是脐血CIK作用后坏死的细胞相对较多，而外周血CIK组中发生凋亡的细胞相对较多。同时，脐血来源比较原始，免疫原性几乎可以忽略；提供脐血CIK的机构会提供相应的安全指标认定，所以脐血CIK的卫生安全及免疫排斥都不用担心。

脐血CIK的主要效应细胞CD3；CD56细胞大量增殖,其相对百分率增长147倍(从0.21％到31％),绝对数增殖倍数为678.7倍,增殖高峰期在第12天。脐血CIK细胞能分泌IL-2,IFN-γ,TNF—α,从第4天开始稳定分泌,分泌IL-2的高峰期在第12天,而IFN-γ,TNF—α分泌高峰在第17天.脐血CIK细胞能分泌多种细胞因子,发挥免疫调节作用，对抗炎、消炎效果突出。

脐血CIK上清液中还有大量的外泌体，外泌体内部包裹了蛋白质、mRNA和microRNA等物质。它可以在细胞之间运输和转移生物活性分子，如蛋白质和RNA，介导靶向细胞间信号传递，甚至是遗传信息的功能性转移，是细胞间通讯的重要介质。研究发现脐血CIK上清液中外泌体尤其是对皮肤组织损伤的再生和修复，如伤口愈合、光防护、促进毛发生长等具有多种作用。

为此，我们提出一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法，具有良好的安全性，在对皮肤抑菌、消炎、修复效果明显，同时还具备了较强的修复能力。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种用于化妆品白细胞提取物及其冻干粉的制备方法，其制备方法包括以下步骤：

S1：采集健康的脐带血，并采用血液分析仪进行培养，对培养后的脐血进行CIK细胞计数；

S2：用淋巴细胞分离液分离单个核细胞；

S3：把所得单核细胞悬浮在CIK细胞无血清培养液中，形成混合液；

S4：在步骤S3所得的混合液中添加添加IL-2、干扰素与CD3单抗，并在CO2孵箱中通过37℃的温度培养14-18天，得到最终培养液；

S5：将步骤S4收集到最终培养的上清液经过3000r，20min离心去细胞碎片及颗粒，再进行10KD超滤,最终获得白细胞提取物。

优选的，所述步骤S3中的无血清培养液是无血清、不含酚红的培养液。