[发明专利]丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用

权利要求书

1.丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：实验材料准备，从昆明医科大学动物实验中心获取60只balb/c小鼠作为实验对象。

步骤二：实验试剂准备，(200、100、50mg·kg^-1)糙苏醇提物溶液(1ml/100g)、生理盐水溶(1ml/100g)、阿司匹林(80mg·kg^-1)、0.9％氯化钠、LPS(17mg·kg^-1)溶液、福尔马林溶液、4％多聚甲醛溶液若干份。

步骤三：实验方法，将实验小鼠随机均分为模型组、正常组、阳性药组、糙苏醇提物高、中、低剂量组共6组(每组10只)，将实验小鼠放置在适宜环境下培养，一周后，分别灌胃糙苏醇提物溶液、生理盐水溶、阿司匹林，24h后眼球采血处死，并分离受试小鼠的肺和肝脏。

步骤四：病理切片处理，取小鼠右肺中叶及肝同一叶于4％多聚甲醛溶液中，其其余肝肺组织自封袋包装，先放置液氮中，再转移到-80℃冰箱低温条件下保存备用，将肝肺组织从福尔马林溶液中取出，经石蜡切面，通过对取样的肝肺组织采用常规HE染色，在光学显微镜下观察肝和组织病理学变化。

步骤五：炎性因子检测，用ELISA试剂盒测定血清、肺匀浆以及肝匀浆中TNF-α、IL-6和MCP-1含量。

步骤六：总结实验结果，根据实验测定结果确定丽江糙苏作用效果。

2.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤一中，实验材料选用年龄为6-8周龄、体重18～22g的健康雄性小鼠。

3.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤三中，模型组小鼠灌胃生理盐水(1ml/100g)(均用5％吐温-80溶解)，正常组小鼠灌胃生理盐水溶液(1ml/100g)，阳性药组小鼠灌胃药阿司匹林(80mg·kg^-1)，糙苏醇提物高、中、低剂量组小鼠分别按200、100、50mg·kg^-1剂量灌胃糙苏醇提物溶液(1ml/100g)。

4.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤三中，模型组、正常组、阳性药组、糙苏醇提物高、中、低剂量组中灌胃频率为每日1次，连续5天。

5.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤三中，在最后一次给药1h后，正常组腹腔灌胃0.9％氯化钠0.2ml，其余各组腹腔灌胃LPS(17mg·kg^-1)溶液(1ml/100g)。

6.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤四中，将肝脏组织放置在组织裂解液中匀浆，组织匀浆液在4℃下以4800转/分钟离心30分钟，以获取肺匀浆以及肝匀浆。

7.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤四中，在光学显微镜下观察病理切片中肺叶组织以及肝脏组织表现特征情况，并记录情况结果。

8.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤五中，在肺匀浆以及肝匀浆中TNF-α、IL-6和MCP-1含量检测前，首先检测血清中TNF-α、IL-6和MCP-1含量，以获取血清中TNF-α、IL-6和MCP-1含量初始含量。

9.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤五中，在肺匀浆以及肝匀浆炎性因子检测后，分别统计模型组、正常组、阳性药组、糙苏醇提物高、中、低剂量组中肺匀浆以及肝匀浆中TNF-α、IL-6和MCP-1含量，并记录统计结果。

10.根据权利要求1所述的丽江糙苏在治疗内毒素血症药物研制中的应用，其特征在于：所述步骤六中，对比模型组、正常组、阳性药组、糙苏醇提物高、中、低剂量组中数据结果，最终获取丽江糙苏的作用效果。