[发明专利]增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用。本发明利用共表达LGI1和ADAM22；或共表达LGI1和ADAM23的方式增强LGI1免疫荧光，所述ADAM22蛋白或ADAM23蛋白可以促使细胞内LGI1驻留在细胞膜上，并且捕获细胞外的LGI1，能够增强LGI1免疫荧光信号，只需微量的ADAM22或ADAM23质粒即可检测出LGI1信号，解决免疫荧光检测血清中LGI1自身抗体信号差的问题。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用。

背景技术

LGI1(富亮氨酸胶质瘤失活基因1)是一种存在于中枢神经系统的分泌型蛋白质，是电压门控钾通道(Voltage-gatedpotassium Channel VGKC)复合物的一种特定成分，在新皮层和海马体中高表达。该蛋白功能受损会影响突触蛋白的连接，同时减少了相关受体介导的突触传递。

LGI1抗体脑炎是一种以癫痫发作、低钠血症及认知功能障碍为主要临床表现的自身免疫性脑炎，常发病于50岁至70岁之间的中老年人之间。男性发病率及年龄高于女性，约占60％～70％。检测LGI1 抗体是诊断LGI1抗体脑炎的特征性指标，常用的方法包括免疫组织化学法、免疫荧光、免疫胶体金、酶联免疫吸附(ELISA)等等。免疫荧光法因其简单快捷、结果直观被广泛应用于自身抗体的检测。然而，由于LGI1是分泌型蛋白，在过表达后，免疫荧光检测患者血清时，信号极其弱，导致很多LGI1 阳性患者血清未能检出信号，检出率极低，容易漏检。为增强LGI1免疫荧光信号，研究表明 (Autoantibodies to Epilepsy-Related LGI1 in Limbic Encephalitis Neutralize LGI1-ADAM22 Interaction andReduce Synaptic AMPA Receptors)在LGI1蛋白加上膜定位信号GPI，可以增强LGI1免疫荧光信号，但是增强幅度并不理想。如何改善LGI1免疫荧光信号仍有待探索。

发明内容

本发明的目的在于提供增强LGI1免疫荧光的方法、LGI1抗体的免疫荧光检测方法及应用，增强 LGI1免疫荧光信号，高灵敏度检测LGI1自身抗体。

本发明提供了一种增强LGI1免疫荧光的方法，包括如下步骤：

共表达LGI1和ADAM22；或共表达LGI1和ADAM23。

优选的，所述LGI1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述ADAM22的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述ADAM23的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了一种LGI1的免疫荧光检测方法，包括如下步骤：

将编码LGI1的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到LGI1重组表达质粒；

将编码ADAM22的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到ADAM22重组表达质粒；或者将编码ADAM23的DNA片段插入至表达载体，提取质粒得到ADAM23重组表达质粒；

将所述LGI1重组表达质粒和所述ADAM22重组表达质粒同时转染入细胞中，细胞培养后进行免疫荧光染色；或者将所述LGI1重组表达质粒和所述ADAM23重组表达质粒同时转染入细胞中，细胞培养后进行免疫荧光染色。

优选的，所述转染时，所述ADAM23重组表达质粒和所述LGI1重组表达质粒的质量比为1:1～599；

所述ADAM22重组表达质粒和所述LGI1重组表达质粒的质量比为1:1～599。

优选的，所述表达载体包括真核载体。

优选的，所述细胞培养的温度为37℃，时间为48h。