[发明专利]一种基于生物效应的昆仙胶囊质量控制方法与应用

权利要求书

1.一种基于生物效应的昆仙胶囊质量控制方法，包括如下步骤：

（1）昆仙胶囊样品乙醇提取物的制备；

（2）采用斑马鱼对步骤（1）中昆仙胶囊样品乙醇提取物进行生物效应检测，用药浓度以昆仙胶囊样品浓度为7 μg/ml为标准；

（3）步骤（2）中昆仙胶囊样品检测结果：统计斑马鱼节间血管总长度为2400 μm以下的昆仙胶囊样品为合格样品；

步骤（2）中采用斑马鱼对步骤（1）中昆仙胶囊样品乙醇提取物进行生物效应检测，包括如下步骤：

①选用20 hpf Tg（flk1:EGFP）血管绿色荧光标记转基因斑马鱼，用1 mg/ml链蛋白酶E脱膜，挑取脱膜后的健康胚胎随机分为空白对照组，阳性对照组，昆仙胶囊处理组，各组设置2个以上平行，每个平行10-12枚胚胎；空白对照组给予：养鱼水中含体积分数为0.1%DMSO；阳性对照组给予：养鱼水中含体积分数为0.1%DMSO+终浓度为0.175 μg/ml的PTK787；昆仙胶囊处理组：养鱼水中含体积分数为0.1%DMSO+终浓度为0.175 μg/ml的PTK787+终浓度为7 μg/ml的昆仙胶囊样品；孵育温度28 ℃，孵育至44 hpf时，在荧光显微镜下观察斑马鱼胚胎血管形态；

②定量分析：使用Imagepro Plus 5.1测量节间血管（ISV）。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（1）中昆仙胶囊样品乙醇提取物的制备方法，包括如下步骤：取昆仙胶囊内容物，加入18-22倍的体积浓度为35-45 %的乙醇，超声提取，固液分离，保留提取液，将药渣重复提取一次，保留提取液，然后合并提取液体浓缩至浸膏，将浸膏干燥制得昆仙胶囊样品提取物。

3.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤（1）中昆仙胶囊样品乙醇提取物的制备方法，包括如下步骤：

取昆仙胶囊内容物5.0 g，以体积浓度为40 %的乙醇定容至100 ml，40 KHZ超声提取1h，过滤，保留提取液，将药渣重复提取一次，保留提取液，然后合并提取液浓缩至浸膏，将浸膏干冷冻干燥制得提取物。

4.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤（1）中将昆仙胶囊样品乙醇提取物用体积浓度为0.5 %的二甲基亚砜配制昆仙胶囊醇提物的储备液，用时根据提取率计算昆仙胶囊浓度。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（2）中斑马鱼为Tg（flk1:EGFP）血管绿色荧光标记转基因斑马鱼。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（3）中统计斑马鱼节间血管总长度为1800- 2400 μm 的昆仙胶囊样品为合格样品。

7.权利要求1-6任一项所述方法在在昆仙胶囊样品质量检查中的应用。

8.如权利要求7所述方法在昆仙胶囊缺方样品、昆仙胶囊投料减半样品检测中的应用。