[发明专利]一种具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

将RUNX1、HOXA9和LHX2三个转录因子同时或者分别导入人多能干细胞诱导分化体系的细胞，并进行诱导表达与诱导分化，得到所述具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞；

所述人多能干细胞诱导分化体系的细胞为人诱导性多能干细胞、中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞中的任意一种或至少两种的组合；

所述转录因子的导入的方法包括基因过表达、内源基因激活或基因编辑中的任意一种或至少两种的组合；

所述诱导分化的方法为基于基质细胞共培养的单层培养诱导分化，包括三个阶段：诱导人多能干细胞产生中胚层细胞、诱导生血内皮细胞分化和诱导造血祖细胞分化和成熟；

所述诱导人多能干细胞产生中胚层细胞中使用D0培养基和D1培养基；

所述诱导生血内皮细胞分化中使用D2培养基；

所述诱导造血祖细胞分化和成熟中使用D9培养基和/或D16培养基；

所述D0培养基包括人碱性成纤维细胞生长因子、重组人活化素、重组人骨形态发生蛋白、GSK-3α/β抑制剂CHIR99021、PI3K抑制剂LY294002和TeSR-E6培养基；

所述D1培养基包括重组人骨形态发生蛋白、ALK5抑制剂A83-01、Wnt通路抑制剂IWR-1-endo和TeSR-E6培养基；

所述D2培养基包括维生素C、重组人FMS样酪氨酸激酶3配体、人碱性成纤维细胞生长因子、人血管内皮生长因子、重组人干细胞因子、重组人白介素3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、丁酸钠和StemPro-34培养基；

所述D9培养基包括重组人促血小板生成素、重组人白介素3、重组人干细胞因子、重组人白介素11、人胰岛素样生长因子1、人血管内皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、重组人骨形态发生蛋白、重组人FMS样酪氨酸激酶3配体、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、强力霉素和StemPro-34培养基；

所述D16培养基包括血清替代物B27、ROCK抑制剂Y-27632、重组人促血小板生成素、重组人干细胞因子、重组人白介素3、重组人FMS样酪氨酸激酶3配体、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、强力霉素和StemPro-34培养基。

2.根据权利要求1所述的具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述RUNX1、HOXA9和LHX2三个转录因子同时或分别进行诱导表达，所述诱导表达开始于中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞。

3.权利要求1或2所述的具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法在制备药物组合物中的应用。