[发明专利]ELISA试剂盒及其制备方法和检测方法在审
| 申请号： | 202210122692.1 | 申请日： | 2022-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN114578043A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 冷毅斌;王长乐;杨飞;易红波 | 申请（专利权）人： | 伊莱瑞特（武汉）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543;G01N33/532 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 方菲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | elisa 试剂盒 及其 制备 方法 检测 | ||
1.一种ELISA试剂盒，其特征在于，包括能够进行点击反应的探针和底物，所述点击反应为采用铜离子催化探针、底物上叠氮基团与炔烃基团的点击反应。
2.根据权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述探针为叠氮化链霉亲和素或者炔烃化链霉亲和素，相应地，所述底物为炔烃化生物素或者叠氮化生物素；
所述叠氮化链霉亲和素由链霉亲和素和叠氮化试剂反应制备而成，所述炔烃化链霉亲和素由链霉亲和素和炔烃化试剂反应制备而成。
3.根据权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述炔烃化生物素选自Biotin-PEG4-Alkyne或者PEG4 carboxamide-Propargyl Biotin；
所述叠氮化生物素选自Biotin Picolyl Azide、Biotin-PEG3-Azide、PEG4carboxamide-6-Azidohexanyl Biotin中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于，还包括HRP标记的链霉亲和素、铜离子催化剂、TMB显色液、包被物、封闭液和/或终止液。
5.权利要求2至4任一项所述的ELISA试剂盒，特征在于，所述ELISA试剂盒能够用于检测人IL-6。
6.一种ELISA检测方法，其特征在于，采用权利要求1至5任一项所述的ELISA试剂盒，采用叠氮化/炔烃化链霉亲和素作为探针和生物素结合，再加入炔烃化/叠氮化生物素进行反应，再加入HRP记的链霉亲和素进行反应，测试OD值。
7.权利要求2至5任一项所述的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
制备探针：采用链霉亲和素与炔烃化试剂或者叠氮化试剂反应；
获取炔烃化生物素或者叠氮化生物素；
包装各组分，即得。
8.根据权利要求7所述的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，所述叠氮化试剂选自Azido-PEG4-NHS、6-Azidohexanoic Acid NHS、6-Azidohexanoic Acid Sulfo-NHS中的至少一种。
9.根据权利要求7所述的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，所述炔烃化试剂选自Alkyne-PEG4-NHS或者Propargyl-NHS。
10.根据权利要求7所述的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，采用链霉亲和素与叠氮化试剂偶联反应的工艺步骤为：在PBS缓冲液中溶解的链霉亲和素，加入含叠氮化试剂的DMSO溶液，搅拌反应，超滤纯化，即得；
采用链霉亲和素与炔烃化试剂偶联反应的工艺步骤为：在PBS缓冲液中溶解的链霉亲和素，加入含炔烃化试剂的DMSO溶液，搅拌反应，超滤纯化，即得。
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