[发明专利]一种具有功能性的双超分子相互作用水凝胶、制备方法及应用

权利要求书

1.一种具有功能性的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，其由荧光蛋白-高分子聚合物

结合体、纳米抗体多聚体在pH 7.2的PBS缓冲液中，4℃的温度下先反应10-30 h，再加入α-环糊精反应10-30 h制备得到；其中：

所述荧光蛋白-高分子聚合物结合体通过融合表达巯基的荧光蛋白、高分子聚合物和还原

剂三(2-羧乙基)膦TCEP在pH 7.2的PBS缓冲液中亲核加成反应得到；融合表达巯基的荧光蛋白的尾部有暴露出巯基SH的半胱氨酸残基，其由绿色荧光蛋白GFP在蛋白质序列的C端添加一段甘氨酸柔性链，并最后添加半胱氨酸Cys获得；高分子聚合物为马来酰亚胺-聚乙二醇PEG-MAL，其化学结构式如下：

；

所述纳米抗体多聚体通过卷曲螺旋蛋白单向融合纳米抗体，并在卷曲螺旋蛋白与纳米抗

体之间通过一段短肽连接获得，所述卷曲螺旋蛋白为二聚体。

2.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，荧光蛋白-高分子聚合结

合体、纳米抗体多聚体和α-环糊精的摩尔比为2：1：（100-200）。

3.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，融合表达巯基的荧光蛋

白制备时，绿色荧光蛋白GFP在蛋白质序列的C端添加的一段甘氨酸柔性链的序列为GGGGGGG。

4.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，融合表达巯基的荧光蛋

白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

5.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，高分子聚合物PEG-MAL

中，修饰马来酰亚胺MAL的聚乙二醇PEG的分子量在2000-10000之间。

6.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，纳米抗体多聚体制备时，

用于连接卷曲螺旋蛋白与纳米抗体的一段短肽的序列为 GGSGGGSGGGSG。

7.根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶，其特征在于，纳米抗体多聚体的氨基

酸序列如SEQ ID NO：2所示。

8.一种根据权利要求1所述的双超分子相互作用水凝胶的制备方法，其特征在于，其由荧

光蛋白-高分子聚合物结合体、纳米抗体多聚体在pH 7.2的PBS缓冲液中，4 ℃的温度下先反应10-30 h，再加入α-环糊精反应10-30 h制备得到；其中：

所述荧光蛋白-高分子聚合物结合体通过融合表达巯基的荧光蛋白、高分子聚合物和还原

剂三(2-羧乙基)膦TCEP在pH 7.2的PBS缓冲液中亲核加成反应得到；融合表达巯基的荧光蛋白的尾部有暴露出巯基SH的半胱氨酸残基，其由绿色荧光蛋白GFP在蛋白质序列的C端添加一段甘氨酸柔性链，并最后添加半胱氨酸Cys获得；高分子聚合物为马来酰亚胺-聚乙二醇PEG-MAL，其化学结构式如下：

；

所述纳米抗体多聚体通过卷曲螺旋蛋白单向融合纳米抗体，并在卷曲螺旋蛋白与纳米抗体之间通过一段连接短肽连接获得，所述卷曲螺旋蛋白为二聚体；

所述α-环糊精的化学结构式如下：

。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，荧光蛋白-高分子聚合结合体、纳米抗体

多聚体和α-环糊精的摩尔比为2：1：（100-200）。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，制备荧光蛋白-高分子聚合物结合体时，

融合表达巯基的荧光蛋白、高分子聚合物和三(2-羧乙基)膦TCEP的摩尔比为1：(10-20) ：(5-10)，反应结束后，使用Ni-NTA亲和层析柱及阴离子交换柱除杂提纯。