[发明专利]基于RAA-CRISPR/Cas12a技术可视化检测玉米褪绿斑驳病毒的方法

权利要求书

1.用于检测玉米褪绿斑驳病毒的试剂盒，其特征在于：包括RAA引物对、ssDNA探针、crRNA和Cas12a蛋白，所述RAA引物对由MCMV-F1引物和MCMV-R3引物组成，所述MCMV-F1引物为序列表中SEQ ID No.1所示的单链DNA分子，所述MCMV-R3引物为序列表中SEQ ID No.4所示的单链DNA分子，所述ssDNA探针为序列表中SEQ ID No.13所示的单链DNA分子，所述crRNA为序列表中SEQ ID No.12所示的RNA分子。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA探针两端分别标记荧光基团和淬灭基团BHQ1。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光基团为FAM。

4.检测玉米褪绿斑驳病毒的方法，其特征在于：包括以待测样品的cDNA为模板，采用权利要求1中所述RAA引物对进行RAA反应获得扩增产物；再采用权利要求1中所述ssDNA探针和权利要求1中所述crRNA对所述扩增产物进行CRISPR/Cas12a反应获得反应产物；根据所述反应产物的荧光确定待测样品是否含有玉米褪绿斑驳病毒。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述CRISPR/Cas12a反应的体系中ssDNA探针的浓度为800nM；

所述CRISPR/Cas12a反应的体系中crRNA和Cas12a的浓度比为5∶1。

6.权利要求1-3任一所述的试剂盒中的RAA引物对。

7.权利要求1-3任一所述的试剂盒在如下任一项中的应用：

(1)检测或辅助检测玉米褪绿斑驳病毒；

(2)制备检测或辅助检测玉米褪绿斑驳病毒的产品。