[发明专利]一种基于相分离研究磷酸化p53稳定性以及细胞内定位的方法在审
| 申请号： | 202210108420.6 | 申请日： | 2022-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN114527054A | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 杨小蓉;戴卓君 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | G01N15/10 | 分类号： | G01N15/10;G01N21/64;G01N33/50;C12N15/65;C12N15/85 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 林德强 |
| 地址： | 510641 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 分离 研究 磷酸化 p53 稳定性 以及 细胞内 定位 方法 | ||
1.一种体系，包括：MED1-IDR蛋白、Pol II蛋白、p53蛋白、p53靶DNA、相分离诱导剂。
2.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述p53蛋白、MED1-IDR蛋白、Pol II蛋白和靶DNA的质量比为(8～12):(0.8～1.2):(0.8～1.2):1。
3.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述p53蛋白为p53蛋白、磷酸化p53蛋白或模拟磷酸化p53蛋白；优选地，所述p53蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述模拟磷酸化p53蛋白为SEQ ID NO.2中第392位的丝氨酸突变为天冬氨酸。
4.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述MED1-IDR蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；所述Pol II蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述p53靶DNA的序列如SEQ ID NO.5所示。
5.根据权利要求1所述的体系，其特征在于，所述诱导剂为拥挤剂；优选地，所述诱导剂占体系的质量比为2～50％。
6.根据权利要求5所述的体系，其特征在于，所述拥挤剂为PEG-8000、PEG-600、PEG-4000、Ficoll、Sucrose。
7.根据权利要求1中所述的体系，其特征在于，所述p53蛋白被荧光标记；优选地，所述荧光标记为荧光标签蛋白或荧光探针。
8.权利要求1～7任一项所述体系在研究p53的液滴形成、磷酸化p53稳定性以及磷酸化调节p53信号转导方面的应用。
9.一种细胞外研究p53对DNA损伤后修复的调控方法，通过权利要求1～7任一项所述的体系诱导p53液滴，监测p53对DNA损伤后修复进程的调控作用。
10.一种细胞内研究p53对DNA损伤后修复的调控方法，通过DNA损伤诱导胞内的p53蛋白形成p53液滴，并观测液滴的性质。
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