[发明专利]一种化学成分明确的用于肌源性细胞体外增殖的培养基

权利要求书

1.一种化学成分明确的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基包括细胞培养补充因子和细胞增殖培养基，其中不含血清成分。

2.根据权利要求1所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述细胞增殖培养基包括肌源性细胞基础培养基和青霉素-链霉素双抗溶液；

优选的，所述肌源性细胞基础培养基和青霉素-链霉素双抗溶液的体积比为99：1；

优选的，所述肌源性细胞基础培养基选自DMEM培养基、MEM培养基、DMEM/F12培养基、F10培养基中的一种。

优选的，所述的青霉素-链霉素双抗溶液中，青霉素的含量为10000U/ml，链霉素的含量为10mg/ml。

3.根据权利要求1所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述细胞培养补充因子包括非必需氨基酸补充剂、脂质、抗氧化剂、重组蛋白、信号通路调节剂、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、亚硒酸钠、地塞米松、白蛋白、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸、皮质醇、碳酸氢钠中的多种。

4.根据权利要求3所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸补充剂选自甘氨酸、丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸中的一种或多种的组合；

所述脂质选自吐温80、花生四烯酸、胆固醇、维生素E醋酸酯、亚油酸、亚麻酸、十四酸、油酸、软脂酸、棕榈油酸、普兰尼克F68、十八酸、油酰基溶血磷脂酸钠盐中的一种或多种的组合；

所述抗氧化剂选自抗坏血酸、抗坏血酸磷酸三钠盐、水溶性维生素E、N-乙酰-L-半胱氨酸中的一种或多种的组合；

所述重组蛋白选自胰岛素样生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、肝细胞生长因子、血小板衍生生长因子中的一种或多种的组合；

所述信号通路调节剂选自Rock抑制剂、佛司可林、P38抑制剂、Rho抑制剂中的一种或多种的组合。

5.根据权利要求1所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，细胞培养补充因子添加总浓度的范围为0.03-50mg/mL。

优选的，所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，细胞培养补充因子添加总浓度的范围为0.5-30mg/mL；

进一步优选的，所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，细胞培养补充因子的添加总浓度为1～4mg/mL。

6.根据权利要求3所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，任一添加的细胞培养补充因子的浓度为0.5ng/mL-30mg/ml；优选的，所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，任一添加的细胞培养补充因子的浓度为1ng/mL-10mg/ml。

进一步优选的，所述用于肌源性细胞体外增殖的培养基中，任一添加的细胞培养补充因子的浓度为1ng/mL-1mg/ml。

7.权利要求1所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基在肌源性细胞体外增殖培养中的应用，其特征在于，采用权利要求1所述的肌源性细胞体外增殖培养基进行体外增殖培养。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基，能够维持肌源性细胞正常的贴壁和增殖能力，和/或保持细胞形态正常，和/或使肌源性细胞在至少3代的传代过程中保持每代增殖3倍的增殖能力，和/或保持活细胞比例不低于80％。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基能提高肌源性细胞肌源性基因和/或细胞外基质基因的表达。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的用于肌源性细胞体外增殖的培养基能维持肌源性细胞肌源性蛋白、细胞外基质蛋白和/或细胞特异性标志蛋白的阳性表达率，维持细胞纯度。