[发明专利]一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体及其应用

权利要求书

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其特征在于：

包含如SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及至少在对应于残基P215的位置处的一个氨基酸取代或功能等同残基，其中该位置参照SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列编号；

所述突变体能够在没有模板的情况下合成核酸片段；

所述突变体能够将修饰的核苷酸掺入到核酸片段中。

2.根据权利要求1所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述取代选自P215D、P215E、P215V。

3.根据权利要求1或2所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体还在对应于选自F267和G372的残基的位置处包含至少一个氨基酸取代或功能等同残基。

4.根据权利要求3所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体在对应于选自P215、F267和G372的残基的位置处包含至少两个氨基酸取代，优选地包含三个氨基酸取代。

5.根据权利要求4所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述取代选自P215D/E/V、F267A/G/S、G372I/Q/T。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体在SEQ ID NO:2或功能等同序列的N末端和/或C末端处包含标签序列，包括组氨酸标签序列。

7.一种核酸分子，所述核酸分子编码如在权利要求1-6中任一项中定义的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体。

8.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求7所述的核酸分子。

9.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求7所述的核酸分子或权利要求8所述的表达载体。

10.用于产生如权利要求1-6中任一项中所定义的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体的方法，其中根据权利要求9所述的宿主细胞在允许编码所述突变体的核酸分子表达的培养条件下被培养，并且其中所述突变体任选地被回收。

11.如权利要求1-6中任一项中所定义的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体用于在没有模板的情况下用3’O-修饰的核苷酸合成核酸分子的用途。

12.用于在没有模板的情况下合成核酸分子的方法，所述方法包括使核酸引物与至少一种核苷酸，优选地至少一种3’O-修饰的核苷酸，和如权利要求1-6中任一项中所定义的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体接触的步骤。