[发明专利]一种基于M基因核苷酸片段删除的流感病毒的致弱方法以及致弱流感病毒株和应用在审
| 申请号： | 202210100385.3 | 申请日： | 2022-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN114410681A | 公开（公告）日： | 2022-04-29 |
| 发明（设计）人： | 陈瑞婷;毛水花;孙慧敏;周孟云;李晓雨;宋家升 | 申请（专利权）人： | 浙江迪福润丝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/44;C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 朱玲艳 |
| 地址： | 310051 浙江省杭州市滨江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 基因 核苷酸 片段 删除 流感病毒 方法 以及 应用 | ||
1.一种流感病毒的致弱方法，其特征在于，包括以下步骤：
删除流感病毒M2部分基因序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。
2.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法的背景毒株包括A/Puerto Rico/8/1934。
3.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述删除包括删除流感病毒M基因第767位碱基到第877位碱基之间任意位置和长度的核苷酸序列。
4.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述删除包括删除M2以下基因序列之一：SEQ ID NO.1～6。
5.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，删除流感病毒M2部分基因序列后的流感病毒M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7～12之一所示。
6.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法包括以下步骤：制备含删除流感病毒M2部分序列后的核苷酸的缺陷型M质粒；将所述缺陷型M质粒、流感病毒反向遗传的其他7个质粒和表达蛋白的质粒共转染细胞，收获病毒，得到致弱流感病毒株；所述反向遗传的其他7个质粒包括表达以下基因组片段的双向表达质粒：PB2、PB1、PA、NP、NS、HA和NA；所述表达蛋白的质粒包括表达PR8-M2蛋白的质粒。
7.一组基于权利要求1～6任一项所述致弱方法制备得到的致弱流感病毒株。
8.根据权利要求7所述的致弱流感病毒株，其特征在于，所述致弱流感病毒株以A/Puerto Rico/8/1934为背景，删除流感病毒M2部分基因序列。
9.一组用于制备致弱流感病毒株的含删除流感病毒M2部分序列后的核苷酸的缺陷型M质粒，其特征在于，所述缺陷型M质粒含权利要求1～6任一项所述致弱方法中所述的删除流感病毒M2部分序列后的核苷酸。
10.权利要求1～6任一项所述的致弱方法或权利要求7或8所述的致弱流感病毒株或权利要求9所述的缺陷型M质粒在制备流感致弱病毒疫苗株中的应用。
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