[发明专利]胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白、基因及其表达方法在审
| 申请号： | 202210095274.8 | 申请日： | 2022-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN114437238A | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 魏春;刘春;刘心雨;刘辰龙;阮柯钦 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胶原 蛋白 牛乳 铁蛋白 融合 基因 及其 表达 方法 | ||
1.一种胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白，其特征在于：所述胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白包括牛乳铁蛋白肽和连接于所述牛乳铁蛋白肽N端的胶原蛋白肽，所述牛乳铁蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述胶原蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.如权利要求1所述的胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白，其特征在于：所述胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
3.如权利要求1所述的胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因。
4.如权利要求3所述的胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因，其特征在于：所述胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
5.一种含如权利要求3所述的胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒。
6.如权利要求5所述的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒的载体为pPIC9K质粒。
7.如权利要求6所述的重组质粒，其特征在于所述重组质粒按如下方法构建：
(1)将如SEQ ID NO:1所示的胶原蛋白肽基因和如SEQ ID NO:3所示的牛乳铁蛋白肽基因分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切法连接到pPIC9K质粒的多克隆位点上，分别得到pPIC9K-COL质粒和pPIC9K-LfcinB质粒；
(2)以步骤(1)制备的pPIC9K-COL质粒为模板，用下列引物扩增出pPIC9K-COL载体片段：
COLZT-F：TAATACGTAGAATTCCCTAGGGCG
COLZT-R：TCCGTAGTAAGGGGCGAATCC
以步骤(1)制备的pPIC9K-LfcinB质粒为模板，用下列引物扩增出LfcinB片段：
LfcinBPD-F：
GATTCGCCCCTTACTACGGATTTAAGTGTAGAAGATGGCAATGGA
LfcinBPD-R：
CTAGGGAATTCTACGTATTAGAAAGCTCTTCTAACACAAGTAATAGATG
(3)将步骤(2)所述的pPIC9K-COL载体片段与LfcinB片段利用一步克隆试剂盒进行无缝连接，所得产物转入大肠杆菌DH5α感受态细胞后，在含氨苄青霉素和卡那霉素的平板上培养后，挑取阳性克隆子测序验证，得到含所述胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒的菌株，提取质粒，得到所述胶原蛋白肽-牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒。
8.一种含如权利要求5所述的重组质粒的菌株。
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