[发明专利]一种马尔尼菲篮状菌甘露聚糖蛋白及其在制备马尔尼菲篮状菌抗体检测试剂盒中的应用

说明书

本发明创造提供了一种马尔尼菲篮状菌甘露聚糖蛋白及其在制备马尔尼菲篮状菌抗体检测试剂盒中的应用，所述甘露聚糖蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.No.1所示。本发明的甘露聚糖蛋白可以与马尔尼菲篮状菌抗体结合，具有良好的敏感性和特异性，敏感性达到85.1%，特异性达到100%。

技术领域

本发明创造属于马尔尼菲篮状菌检测领域，尤其是涉及一种马尔尼菲篮状菌甘露聚糖蛋白及其在制备马尔尼菲篮状菌抗体检测试剂盒中的应用。

背景技术

马尔尼菲篮状菌（Talaromyces marneffei）原名马尔尼菲青霉菌（Penicillium marneffei）是迄今所发现的惟一能使人类致病的双相青霉菌，感染人或动物时以酵母相存在于宿主体内。在30℃时马尔尼菲篮状菌呈现为菌丝型态，而在37℃时则为酵母型态。前者在培养基中可形成红色素，后者没有。只有酵母型态才有致病性。此外，马尔尼菲篮状菌在两者之间转换的时间长短不一，从酵母型态变为菌丝型态较容易，只需要1～2天即长出帚状枝并产生红色色素；而后者转变为前者需要3个星期以上，会经过一个短棒状或畸形的过渡期，所以无法在早期就判断是单型态篮状菌。

马尔尼菲篮状菌病(TM)主要是侵犯单核吞噬细胞系统，即肺、肝、肠淋巴组织、淋巴结、脾、骨髓、肾和扁桃体等，以肺及肝最为严重。马尔尼菲篮状菌能侵入机体，在营养丰富的深部组织器官生长繁殖，造成致命损伤。马尔尼菲篮状菌感染者尤以中国南部和东南亚地区居多。马尔尼菲篮状菌病可发生于健康者，但更多见于免疫缺陷或免疫功能抑制者，是艾滋病(AIDS)患者常见的机会性感染和致死原因之一。越南研究结果显示马尔尼菲篮状菌病在AIDS患者的机会性感染中居第3位。近年来，随着艾滋病的流行范围扩大以及糖皮质激素、免疫抑制剂等大量使用，马尔尼菲篮状菌病的发病率逐年上升。

马尔尼菲篮状菌病患者常规生化检查结果异常的主要包括：血红蛋白、血小板、红细胞计数、白细胞计数、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、白蛋白、球蛋白、免疫功能等。上述检查结果无明显特异性，需与患者的临床表现相结合，在疑似马尔尼菲篮状菌病或抗结核治疗无效时，才会对病原体进行检查。目前确诊马尔尼菲篮状菌病主要依靠病原菌培养，由于培养时间一般需要7~10d，因此早期诊断非常困难，容易错过患者治疗最佳时间，导致病情恶化等不良后果。

现有文献报道血清半乳甘露聚糖(galactomannan，GM)抗原可作为检测马尔尼菲篮状菌的标志物，患有马尔尼菲篮状菌病的艾滋病患者血清GM检测OD值显著高于正常值，可用于马尔尼菲篮状菌的早期诊断。但是由于曲霉菌属和青霉菌属的细胞壁中都含有GM，因此GM用于检测马尔尼菲篮状菌时会与青霉菌属存在交叉反应，特异性较低。

甘露聚糖蛋白(Mp1p)是马尔尼菲篮状菌细胞壁特异性的多糖抗原，是马尔尼菲篮状菌感染巨噬细胞的重要致病因子。国内艾滋病合并马尔尼菲篮状菌病临床诊疗的专家共识指出，甘露聚糖蛋白可应用于马尔尼菲篮状菌感染诊断，通过间接免疫荧光法和酶联免疫法检测相对应的抗体，可成功检测马尔尼菲篮状菌感染，且与其他病原菌无交叉反应。

半乳甘露聚糖是一种多糖抗原，主要存在于曲霉菌属和青霉菌属细胞壁，是检测侵袭性曲霉感染的重要标志物。侵袭性曲霉感染人体后，会释放半乳甘露聚糖，马尔尼菲篮状菌在人体内生产时同样也会释放半乳甘露聚糖。有文献报道半乳甘露聚糖可用于马尔尼菲篮状菌病的早期诊断，但是基于两种菌都可产生半乳甘露聚糖，所以会存在假阳或假阴，特异性较差。

为解决上述问题，有文献报道从马尔尼菲篮状菌液体培养基中提取相关蛋白抗原，培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化、再经透析和除菌，最终制备成马尔尼菲篮状菌纯蛋白衍生物。此种方法受培养基的使用，pH和温度的控制等影响较大，只能小剂量的提取蛋白、效率低、重复性差，且提取物会含有多种蛋白，不具备高特异性标志物条件，因此不适合应用于血清学免疫诊断马尔尼菲篮状菌病。