[发明专利]一种马尔尼菲篮状菌甘露聚糖蛋白及其在制备马尔尼菲篮状菌抗体检测试剂盒中的应用有效
| 申请号： | 202210090101.7 | 申请日： | 2022-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN114106118B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 杨光;彭洁;严俊;盛长忠;粟艳;周泽奇 | 申请（专利权）人： | 丹娜（天津）生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/385 | 分类号： | C07K14/385;C07K1/22;C12N15/70;C12N15/31 |
| 代理公司： | 天津合正知识产权代理有限公司 12229 | 代理人： | 王雨杰 |
| 地址： | 300467 天津市滨海新区中*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种马 尔尼菲篮状菌 甘露 聚糖 蛋白 及其 制备 马尔尼菲篮状菌 抗体 检测 试剂盒 中的 应用 | ||
1.一种检测马尔尼菲篮状菌抗体的甘露聚糖蛋白，其特征在于：其氨基酸序列为SEQID No.1所示的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的检测马尔尼菲篮状菌抗体的甘露聚糖蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)以含有甘露聚糖蛋白Mp1p编码基因的质粒为模板，采用定点突变方法，以突变引物为特异性扩增引物，进行PCR扩增，获得所述甘露聚糖蛋白的编码基因；
(2)将步骤(1)获得的编码基因连接至经Dpn1消化甲基化的模板质粒，获得重组表达质粒；
(3)将步骤(2)的重组表达质粒导入感受态细胞中，经过卡那霉素抗性筛选后进行培养发酵，发酵液经过镍柱纯化获得甘露聚糖蛋白。
3.根据权利要求2所述的检测马尔尼菲篮状菌抗体的甘露聚糖蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的突变引物为：
F1: CGCACGAACTGGCGCCCATTAGCCGTCAACTG；
R1: CAGTTGACGGCTAATGGGCGCCAGTTCGTGCG；
F2: GTCAACTGAGCGATCAGATTGCGGCGGGTATTAAG；
R2：CTTAATACCCGCCGCAATCTGATCGCTCAGTTGAC。
4.根据权利要求2所述的检测马尔尼菲篮状菌抗体的甘露聚糖蛋白的制备方法，其特征在于：
步骤（1）中的PCR反应体系为：
质粒模板1μL，突变引物混合物1μL，1×含Mg2+ Buffer 5μL，dNTP mix 5μL，DNAPolymerase 1μL，nuclease-free water 36μL，总体积为50μL；
PCR反应条件为：
95℃预变性3min；95℃ 30sec，55℃ 30sec，68℃ 30sec，20个循环；68℃ 10min；4℃长时间保持。
5.一种标记复合物，其特征在于：所述标记复合物包括权利要求1所述的甘露聚糖蛋白和标记物，所述标记物包括但不限于下述中的任意一种：胶体金、荧光微球或HRP。
6.一种用于检测马尔尼菲篮状菌抗体的试纸条，其特征在于：所述试纸条的原料包括下述中的任意一种或其组合：权利要求1所述的甘露聚糖蛋白、权利要求5所述的标记复合物。
7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于：所述试纸条包括NC膜、吸水垫、荧光垫、样品垫，所述荧光垫上包被有权利要求6所述的标记复合物和标记物标记的鸡IgY；所述NC膜上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有浓度为1mg/mL的权利要求1所述的甘露聚糖蛋白，所述质控线处包被有浓度为1mg/mL的羊抗鸡IgY抗体。
8.一种用于检测马尔尼菲篮状菌抗体的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂包括权利要求1所述的甘露聚糖蛋白、权利要求5所述的标记复合物、权利要求6或7所述的试纸条中一种或几种。
9.一种用于检测马尔尼菲篮状菌抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括权利要求1所述的甘露聚糖蛋白、权利要求5所述的标记复合物、权利要求6或7所述的试纸条中一种或几种。
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