[发明专利]一种牛无绿藻PCR引物及其应用

权利要求书

1.一种根据牛无绿藻(Prototheca bovis)cob基因设计的PCR引物，其核苷酸序列如下：

cob-5-F：CTAGTTATTCAAGTCCTCG；

cob-5-R：AATTACTGTAGCACCCC；

所述牛无绿藻cob基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述的PCR引物在牛无绿藻非诊断目的检测中的应用。

3.一种牛无绿藻检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的PCR引物。

4.一种非诊断目的的牛无绿藻实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)根据核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的牛无绿藻cob基因设计PCR引物，所述PCR引物的核苷酸序列如下：

cob-5-F：CTAGTTATTCAAGTCCTCG；

cob-5-R：AATTACTGTAGCACCCC；

2)向检测样品中加入所述PCR引物和SYBR荧光染料，进行实时荧光定量PCR反应；

3)根据Ct值大小对牛无绿藻进行定性或定量检测。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR反应的体系如下：SYBR Green Premix Ex Taq Ⅱ 12.5μL，cob-5-F 0.8μL，cob-5-R 0.8μL，模板1μL，RNase-Free Water补足至25μL。

6.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR反应的程序如下：95℃预变性30s；95℃变性5s，59℃退火60s，72℃延伸30s，共40个循环；72℃再次延伸10min。

7.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述检测样品为牛奶。