[发明专利]一种基于适配体检测C-反应蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种基于适配体检测C‑反应蛋白的方法；其中所述适配体的序列如SEQ ID NO.1所示。并基于适配体建立了一种无标记的CRP检测方法，所需适配体无需任何的化学修饰和固定化，无需使用抗体和试剂盒，以降低其检测成本，减少试剂批间差异和合成时间。并且该方法能够灵敏、特异性的测定血清中的超敏CRP含量，用于预测心血管事件发生的风险。而且所需适配体无需任何的化学修饰和固定化，快速完成CRP检测，用时少；线性范围0.0125‑15μg/mL，检测线4ng/mL(35pM)。极大的节约了试剂成本和合成时间。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种基于适配体检测C-反应蛋白的方法。

背景技术

在测定C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)的方法中，扩散法灵敏度较低，胶乳凝聚法易受其他因素干扰，产生假阳性的结果，因此对样品预处理的要求较高；免疫透射比浊法和免疫散射比浊法灵敏度不足以预测心血管事件的危险；基于适配体和纳米金可视化检测CRP，可以在5分钟内出结果，但是该方法只能用于尿液样本中的检测；基于抗原-抗体相互作用的免疫检测方法，也存在抗体获得成本高、周期长、有免疫原性、不易修饰、难于保存等缺陷。CRP的临床检测目前仍存在标准化的问题，目前hs-CRP测定在各方法间甚至各试剂盒间仍然存在较大的差异,从而影响了患者个体资料与流行病学建立的正常值上限进行对照。因此，急需一种可以准确测定C-反应蛋白的方法。

发明内容

本发明目的，在于提供一种检测C-反应蛋白的方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明提供一种检测C-反应蛋白的方法，包含以下步骤：

S1：将适配体与待测样本混合得混合物A；

S2：向混合物A中加入切刻内切酶和适配体的互补DNA进行酶切反应，然后离心得上清；

S3：取上清进行毛细管电泳检测。

在本发明的一些实施方式中，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明的一些实施方式中，所述互补DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的一些实施方式中，所述适配体需要进行预处理，其具体为：将适配体93～97℃加热8～12min后于13～17℃冷却8～12min。

在本发明的一些实施方式中，步骤S1所述的混合的条件为13～17℃、27～33min。

在本发明的一些实施方式中，步骤S2所述的酶切反应条件为35～39℃、55～65min。

在本发明的一些实施方式中，在完成酶切反应之后，需要停止酶切，处理方式为高温灭活，具体为75～85℃加热18～24min。

在本发明的一些实施方式中，所述内切酶的酶活为5～15U。

在本发明的一些实施方式中，所述电泳条件为电压12～18kV；进样时间3～5min；UV检测波长：250～300nm。

在本发明的一些实施方式中，所述检测时的进样为重力进样，其中进样高度15～16cm。

在本发明的一些实施方式中，所述电泳的缓冲液组成为：40～50mM硼砂和60～80mM Tris。

在本发明的一些实施方式中，其特征在于，所述缓冲液的pH为8～10。

本发明的有益效果是：